Quantificação de óxido nítrico em músculo estriado esquelético de ratos através de quimiluminescência : modelos de lesão por isquemia-reperfusão e caquexia induzida por tumor de Walker-256

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Patologia Experimentalpt_BR
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dc.contributor.advisorCecchini, Rubens [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorIamamoto, Cristiane Akemipt_BR
dc.contributor.bancaNavegantes, Luiz Carlos Carvalhopt_BR
dc.contributor.bancaSardinha, Wander Eduardopt_BR
dc.contributor.bancaCecchini, Rubenspt_BR
dc.contributor.coadvisorArmani, Alessandra Lourenço Cecchini [Coorientadora]pt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T12:40:14Z
dc.date.available2024-05-01T12:40:14Z
dc.date.created2007.00pt_BR
dc.date.defesa06.07.2007pt_BR
dc.description.abstractResumo: A participação do óxido nítrico (•NO) e do peroxinitrito (ONOO-) tem sido sugerida na lesão por isquemia-reperfusão (LIR) do músculo esquelético e, recentemente, na caquexia associada ao câncer Em virtude das dificuldades encontradas na quantificação do •NO, avaliações indiretas de sua síntese têm sido utilizadas, freqüentemente, para a investigação de efeitos atribuídos ao •NO tanto em condições fisiológicas, como patológicas A produção de •NO foi diretamente detectada no músculo esquelético, nos modelos experimentais de LIR e caquexia induzida por tumor de Walker-256, através de um método de quimiluminescência altamente sensível e específico Ratos Wistar machos adultos foram submetidos a 4 h de isquemia induzida pela aplicação de torniquete na extremidade proximal da pata posterior esquerda, acompanhada por 1 (IR1), 2 (IR2) ou 4 (IR4) h de reperfusão NG-nitro-L-arginina metil éster (LNAME – 2 mg/kg), aminoguanidina (AG – 5 mg/kg) ou desferrioxamina (DFO – 6 mg/kg) foi administrado intraperitonealmente (ip) 1 h antes do início da reperfusão A caquexia foi induzida em ratos pelo tumor de Walker-256, através da inoculação subcutânea (sc) de 8x17 células tumorais na porção lateral da pata posterior direita Estes animais foram divididos em 4 grupos, de acordo com o tempo decorrido após o implante do tumor: 3 (T3), 5 (T5), 1 (T1) ou 14 dias (T14) Para eliminar o efeito da redução de ingestão alimentar apresentada pelos grupos experimentais, foram realizados grupos controles PBS / Pair Fed Cada grupo experimental foi comparado com o respectivo grupo controle PBS / Pair Fed LNAME (2 mg/kg) ou AG (5 mg/kg) foi administrado ip diariamente até o 5° dia após o implante do tumor Em ambos os modelos, os músculos astrocnêmios esquerdos foram removidos e homogeneizados (,5% m/v) com Na2CO3 2mM, pH 8,5, degaseificado pelo N2, diluídos 2 vezes e adicionados à mistura de reação (luminol 4,39 µM, DFO 36,58 µM e H2O2 2,44 mM, 25oC) A solução padrão de •NO foi utilizada para a curva de calibração (2,8-355,55 aM) A altura e a área sob as curvas de quimiluminescência foram utilizadas para a quantificação de •NO As concentrações de •NO (média ± EPM fmol / g de tecido) encontradas na LIR foram: Controle (4,73 ± ,24); Isquemia (4,16 ± ,99); IR1 (4,26 ± ,32); IR2 (5,84 ± 1,27); IR4 (18,25 ± 2,4); IR4AG (8,8 ± ,69); IR4LNAME (3,33 ± ,298); IR4DFO (2,83 ± ,3) A perda de massa muscular (%) foi utilizada como indicador den caquexia: PBS / Pair Fed 5 (-7,56 ± 1,3); PBS / Pair Fed 1 (5,26 ± ,38); PBS / Pair Fed 14 (9,11 ± 1,2); T3 (7,36 ± 2,76); T5 (11,63 ± 2,21); T5LNAME (16,71 ± 3,28); T5AG (11,24 ± 1,13); T1 (35,38 ± 1,6); T14 (33,9 ± 2,37) As concentrações de •NO nestes animais foram: PBS / ad libitum (4,81 ± ,18); PBS / Pair Fed (5 2,52 ± ,25); PBS / Pair Fed 1 (1,96 ± ,14); PBS / Pair Fed 14 (1,84 ± ,11); T3 (1,35 ± ,15); T5 (5,2 ± ,48); T5LNAME (2,6 ± ,18); T5AG (2,41 ± ,2), T1 (1,92 ± ,8); T14 (2,13 ± ,32) Houve aumento da concentração de •NO após 4 h de reperfusão, sendo significativamente inibido pela AG e bloqueado pelo LNAME e pela DFO Estes resultados revelam o envolvimento do •NO após 4 h de reperfusão e confirmam estudos prévios em nosso laboratório mostrando o aumento de hidroperóxidos lipídicos e da expressão de iNOS no músculo após 4 h de reperfusão, mas não após a isquemia No modelo de caquexia, houve redução da concentração de •NO em T3, aumentando significativamente em T5 Este aumento foi bloqueado pelo uso de LNAME ou AG O aumento no 5o dia ocorreu, possivelmente, pela ativação de iNOS pelo TNF-a, conforme verificado por outros autores A partir do 1o dia, não houve qualquer alteração da concentração de •NO Houve aumento da concentração de hidroperóxidos lipídicos em T5, que foi significativamente diminuído por ambos os inibidores de NOS, demonstrando o envolvimento do •NO na peroxidação lipídica observada no músculo esquelético Esta é a primeira evidência direta da geração e participação do •NO na LIR do músculo esquelético Nossos resultados mostram, ainda, o envolvimento do •NO na lesão peroxidativa observada no músculo esquelético de ratos com caquexia induzida pelo tumor de Walker-256pt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Nitric Oxide (•NO) and peroxynitrite (ONOO) has been suggested to be implicated in skeletal muscle damage during Ischemia–Reperfusion Injury (IRI) and more recently, in cancer cachexia Since •NO measurement is difficult, indirect approach has been used as tools to investigate the role of •NO in both physiological and pathological conditions Using a specific and sensitive chemiluminescence method, •NO production was directly measured on skeletal muscle in experimental models of IRI and Walker-256 tumour-induced cachexia Adult male Wistar rats were subjected to 4 h of ischemia by applying of a tourniquet at left hindlimb followed by 1 (IR1), 2 (IR2) or 4 h (IR4) reperfusion NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME - 2mg/kg), aminoguanidine (AG - 5mg/kg) or desferrioxamine (DFO – 6mg/kg) was injected intraperitoneally (ip) 1 h prior beginning reperfusion Cachexia was induced in rats by inoculation of 8x17 Walker-256 tumor cells at right hindlimb subcutaneously (sc) These animals were divided into 4 groups, according to number of days following tumor implantation: 3 (T3), 5 (T5), 1 (T1) and 14 days (T14) To remove the effect of food intake reduction seem in experimental groups, PBS / Pair Fed control groups were also included Each experimental group was compared with its respective PBS / Pair Fed control group LNAME (2 mg/kg) or AG (5 mg/kg) was administered ip daily until 5° day after tumor implantation Left gastrocnemius muscles of both models were excised, homogenized (5% w/v) in 2mM Na2CO3 at pH 85 previously degassed by N2, diluted 2 times and added to reaction mixture (439 µM luminol, 3658 µM DFO, 244 mM H2O2 and degassed 2mM Na2CO3, pH 85, 25oC) Standard •NO solution was used for the calibration curve (28-35555 aM) using the height and the area under chemiluminescence curves for the •NO measurement •NO levels expressed as a mean ± SEM fmol/g of tissue were: Control (473 ± 24), Ischemia (416 ± 99), IR1 (426 ± 32), IR2 (584 ± 127), IR4 (1825 ± 24), IR4AG (88 ± 69) IR4LNAME (333 ± 29) and IR4DFO (283 ± 3) Loss of muscle mass (%) was used as cachexia marker: PBS / Pair Fed 5 (-756 ± 13); PBS / Pair Fed 1 (526 ± 38); PBS / Pair Fed 14 (911 ± 12); T3 (736 ± 276); T5 (1163 ± 221); T5LNAME (1671 ± 328); T5AG (1124 ± 113); T1 (3538 ± 16); T14 (339 ± 237) •NO levels were: PBS / ad libitum (481 ± 18); PBS / Pair Fed 5 (252 ± 25); PBS / Pair Fed 1 (196 ± 14); PBS / Pair Fed 14 (184 ± 11); T3 (135 ± 15); T5 (52 ± 48); T5LNAME (26 ± 18); T5AG (241 ± 2); T1 (192 ± 8); T14 (213 ± 32) •NO levels increased only after 4 h of reperfusion which was significantly inhibited by AG and suppressed by LNAME and DFO These results revealed the involvement of •NO after 4 h reperfusion and confirm previous studies in our laboratory that showed increased muscle lipid hydroperoxides and iNOS expression, which occurred after 4 h reperfusion, but not after ischemia In cachexia model, •NO levels decreased on the 3th day and increased significantly on the 5th This increase was suppressed by LNAME or AG use Increase of •NO levels on the 5th day must have occurred after iNOS activation by TNF-á as verified by others authors There were no changes of •NO levels on the 1th and 14th days Lipid hydroperoxides levels increased on the 5th day that was significantly decreased by both NOS inhibitors, supporting the involvement of •NO in skeletal muscle lipid peroxidation This is the first direct evidence showing increased generation and participation of •NO in skeletal muscle ischemiareperfusion injury Our data also evidenced the involvement of •NO in skeletal muscle peroxidative damage showed in rats with Walker-256 tumor-induced cachexiapt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10200
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectIsquemiapt_BR
dc.subjectCâncerpt_BR
dc.subjectPatologia experimentalpt_BR
dc.subjectÓxido nítricopt_BR
dc.subjectCaquexiapt_BR
dc.subjectNitric oxidept_BR
dc.subjectIschemiapt_BR
dc.subjectExperimental pathologypt_BR
dc.subjectCachexypt_BR
dc.subjectChemiluminescencept_BR
dc.subjectCancerpt_BR
dc.titleQuantificação de óxido nítrico em músculo estriado esquelético de ratos através de quimiluminescência : modelos de lesão por isquemia-reperfusão e caquexia induzida por tumor de Walker-256pt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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