Métodos imunoquímicos para detecção de ocratoxina A, produção de imunorreagente e aplicação em diferentes matrizes alimentares

dataload.collectionmapped01 - Doutorado - Ciência de Alimentospt_BR
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dc.contributor.advisorHirooka, Elisa Yoko [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorFujii, Simonept_BR
dc.contributor.bancaScussel, Vildes Mariapt_BR
dc.contributor.bancaKemmelmeier, Carlospt_BR
dc.contributor.bancaItano, Eiko Nakagawapt_BR
dc.contributor.bancaOliveira, Tereza Cristina Rocha Moreira dept_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T13:09:13Z
dc.date.available2024-05-01T13:09:13Z
dc.date.created2007.00pt_BR
dc.date.defesa26.01.2007pt_BR
dc.description.abstractResumo: O monitoramento visando controle de ocratoxina (OTA) no sistema agroalimentar requer métodos analíticos eficientes, devendo-se estimular a produção de reagentes para o desenvolvimento de metodologia acessível à condição nacional A produção de imunorreagentes específicos, associada ao desenvolvimento de ensaios imunoquímicos possibilitaria aos laboratórios de controle de qualidade o acesso a metodologias que auxiliariam na prevenção da contaminação e conseqüentemente no fornecimento de alimentos mais seguros Assim, ELISA competitivo indireto (ic-ELISA) baseado em anticorpo monoclonal (AcM) anti-OTA7 foi desenvolvido e seu desempenho comparado mediante cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) A análise de 68 amostras de café da região Norte do Estado do Paraná (safra 23) demonstrou confiabilidade e eficiência de ic-ELISA, sendo o coeficiente de correlação com CLAE de ,9 OTA foi detectada em 15 amostras (22,1 %) por CLAE (,84 a 4,7 µg/Kg) e 1 amostras (14,7 %) por ic-ELISA (3,9 a 7,3 µg/Kg), sendo a relação ELISA/CLAE de 1,1 a 1,6 Aliada à baixa contaminação natural, a OTA não foi detectada por ambos os métodos em 77,9 % (53) das amostras, demonstrando qualidade e segurança do café pertencente à safra 23 Considerando a dificuldade ao acesso de análise avançada de resíduos tóxicos na rotina laboratorial e por outro lado, pela necessidade em minimizar a dependência de importação de kits imunoquímicos, foi introduzida a tecnologia de produção de AcM empregando hibridoma linhagem OTA1 O cultivo celular em meio sintético e cavidade peritoneal de camundongo resultou em 387,23 mg de IgG purificada, mantendo-se 8,82 % da atividade anti-OTA O AcM foi utilizado na confecção de coluna de imunoafinidade (CIA) baseada em sílica-hidrazida (CIA-Hz), testando-se quatro concentrações de IgG imobilizada (16,43; 19,79; 23,15 e 22,12 mg IgG/g sílica) As CIA-Hz apresentaram retenção de 8,6; 9,62; 11,24 e 1,67 ng de OTA, respectivamente, e atividade específica variando de ,96 a ,98 A CIA-Hz selecionada (11,24 ng de OTA/11,57 mg de IgG imobilizada) caracterizou-se por eficiência na limpeza de diferentes matrizes (arroz, milho, café) artificialmente contaminados com OTA, com recuperação média de 62,87 (arroz), 71,33 (milho) e 54,58 % (café verde) CIA-Hz apresentou eficiência entre 78,23 a 81,31 % em relação à CIA OchraTest (produto comercial), demonstrando melhor desempenho da coluna comercial A reutilização de CIA foi avaliada após procedimento de regeneração da coluna mediante estudo de recuperação de OTA A utilização sucessiva de CIA-Hz reduziu gradualmente a recuperação de OTA para 29,13 % (arroz), 44,9 % (milho) e 1,23 % (café), após cinco usos consecutivos CIA OchraTest apresentou recuperação aceitável após 4 regenerações na análise de arroz e milho, com manutenção média de 94,82 % (94,47-95,17 %) e 92,95 % (92,56-93,33 %) da capacidade original da coluna, respectivamente A eficiência de CIA-Hz em relação à CIA OchraTest foi de 78,23-81,31 % (primeiro uso), 67,41-75,16 % (segundo uso), 48,82-58,4 % (terceiro uso), 4,1-61,9 % (quarto uso) e 39,15-73,33 % (quinto uso), dependendo da matriz De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que a CIA-Hz desenvolvida pode ser aplicada na análise de OTA, com restrição ao uso único, devendo-se prosseguir com o estudo inserindo novas condições e ensaios de padronizaçãopt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: The monitoring targeted on OTA control in agri-food system should be coupled with accurate analytical method, where the ready reagent production with analytical development proposal, accessible at the national condition, should be stimulated The production of specific imunorreagent associated with development of immunochemical assay could possible to laboratories of quality control the access to methodologies to prevention of the contamination and supply of safe food Indirect competitive ELISA (ic-ELISA) based on anti-OTA7 monoclonal antibody (mAb) was developed, and its performance compared by high performance liquid chromatografy (HPLC) The analysis of 68 coffee samples of the Northern Paraná state (23 crop) demonstrated reliability and efficiency of ic-ELISA, with HPLC correlation coefficient of 9 OTA was detected in 15 samples (221%) by HPLC (84 to 47 µg/Kg) and 1 samples (147%) by ic-ELISA (39 to 73 µg/Kg), with ELISA/HPLC relation from 11 to 16 In addition to low natural contamination, OTA was not detected by both methods in 779 % (53) samples, indicating adequate quality and safety of coffee belonging to 23 crop Taking into account the difficulty in accessing advanced analysis of toxic residues in routine laboratory assay, and further request on minimizing the dependence on immunochemical kit importation, the technology of mAb production using hybridoma cell line OTA1 was introduced The cell culture in synthetic medium and mouse ascite tumour raised 38723 mg of purified IgG with 882 % of anti-OTA activity This mAb was used to prepare the immunoaffinity column (IAC) based in hydrazide-sililca (IAC-Hz), carrying out four concentrations of immobilized IgG (1643, 1979, 2315 and 2212 mg IgG/g silica) The IAC-Hz showed OTA retention of 86, 962, 1124 and 167 ng respectively, and specific activity ranging from 96 to 98 The selected IAC-Hz (1124 ng of OTA/1157 mg of immobilized IgG) was characterized by efficient cleaning-up when different artificially OTA contaminated matrices were tested (rice, corn, coffee), with recovery average of 6287 (rice), 7133 (corn) and 5458 % (green coffee) IAC-Hz showed efficiency from 7823 to 8131 % when compared with IAC OchraTest (commercial product), which confirm higher performance of the commercial column The reusability of IAC was evaluated after regeneration of the column by assessing the recovery of OTA The successive use of IAC-Hz gradually reduced the OTA recovery to 2913 % (rice), 449 % (corn) and 123 % (coffee), after five consecutive uses The IAC OchraTest kept acceptable recovery after 4 regenerations concerning rice and corn analysis, ie average retention capacity of 9482 % (9447-9517 %) and 9295 % (9256-9333 %) when compared with original column capacity, respectively The efficiency of IAC-Hz in relation to IAC OchraTest was 7823-8131 % (first use), 6741-7516 % (second use), 4882-584 % (third use), 41-619 % (fourth use) and 3915-7333 % (fifth use), depending on the substrate in concern Based on data, the developed IAC-Hz can be used in the OTA analysis, but restricted to only use, and further study should be continued inserting new condition and standardization of assaypt_BR
dc.description.notesTese (Doutorado em Ciência de Alimentos) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/10978
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeDoutoradopt_BR
dc.relation.coursenameCiência de Alimentospt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Agráriaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Ciência de Alimentospt_BR
dc.subjectAlimentospt_BR
dc.subjectQualidadept_BR
dc.subjectAlimentospt_BR
dc.subjectIndústriapt_BR
dc.subjectCromatografia líquida de alta eficiênciapt_BR
dc.subjectOchratoxinspt_BR
dc.subjectHigh speed liquid chromatographypt_BR
dc.subjectFood - Qualitypt_BR
dc.titleMétodos imunoquímicos para detecção de ocratoxina A, produção de imunorreagente e aplicação em diferentes matrizes alimentarespt_BR
dc.typeTesept_BR

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