Avaliação dos efeitos do monastrol em linhagens celulares humanas de adenocarcinoma de mama (MCF-7) e epitélio mamário (HB4a)

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dc.contributor.advisorMantovani, Mário Sérgio [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorMarques, Lilian Arealpt_BR
dc.contributor.bancaLepri, Sandra Reginapt_BR
dc.contributor.bancaCaetano, Lucia Giulianopt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:08:38Z
dc.date.available2024-05-01T14:08:38Z
dc.date.created2015.00pt_BR
dc.date.defesa31.03.2015pt_BR
dc.description.abstractResumo: O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete as mulheres de todo mundo e a que representa as maiores taxas de mortalidade nesse grupo A maioria das drogas antineoplásicas atuais não apresentam seletividade e, portanto, afetam tanto as células tumorais quanto as saudáveis Dessa forma, a busca por novas drogas anticâncer é de grande interesse O monastrol é uma molécula sintética que atua como inibidor alostérico da cinesina mitótica Eg5 Estudos mostram que esta cinesina está superexpressa em células tumorais quando comparadas com células normais Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antiproliferativo do monastrol em célula humana tumoral de adenocarcinoma mamário (MCF-7) e não tumoral de epitélio de mama (HB4a) As células MCF-7 e HB4a foram expostas ao monastrol nas concentrações de 5, 25, 5, 75 e 1 µM para a análise de citotoxicidade (ensaio MTT) e proliferação celular (Real-time Cell Analyzer); e nas concentrações de 25 e 5 µM para os demais testes Foram avaliadas por citometria de fluxo a dinâmica do ciclo celular (Iodeto de propídeo) e indução de apoptose (Anexina V), além da obtenção de índice mitótico e apoptótico por análise morfológica com coloração de Hoechst 33342 Os níveis de mRNA de genes do ciclo celular (TP53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B e CDKN1C), sinalizador de danos (GADD45A) e apoptose (BAX, BAK, BCL2 e BCLXL) foram verificados por RT-qPCR No ensaio de citotoxicidade, o monastrol reduziu a viabilidade em relação ao controle apenas na linhagem tumoral MCF-7 a partir da concentração de 5 µM Na avaliação da proliferação celular em tempo real também houve uma queda na proliferação das células MCF-7, enquanto as células HB4a não apresentaram alterações na cinética de crescimento A análise da apoptose mostrou que o monastrol não induz morte celular por apoptose em nenhuma das linhagens celulares Já na análise do ciclo celular, a exposição das células MCF-7 ao monastrol (5 µM) levou ao aumento da população G1 e G2/M com concomitante diminuição de S, enquanto na linhagem celular HB4a houve aumento de G2/M e diminuição de G1 Ambas células apresentaram aumento dos níveis de índice mitótico A análise da expressão gênica demonstrou que o monastrol aumentou em 5 vezes os níveis de RNAm do gene CDKN1A nas células MCF-7 e reduziu em 2 vezes os níveis de RNAm de CDKN1C na linhagem HB4a Estes resultados sugerem que o monastrol possui maior citotoxicidade sobre as células tumorais MCF-7, quando comparados com as células não tumorais HB4a, tornando-o um possível quimioterápico anticâncerpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Breast cancer is the cancer that affects more women around the world and that is the highest mortality rates in this group Most current anticancer drugs do not exhibit selectivity, and therefore affect both the tumor cells and healthy ones Thus, the search for new anticancer drugs is of great interest The monastrol is a synthetic molecule that acts as an allosteric inhibitor of the mitotic kinesin Eg5 Studies show that this kinesin is overexpressed in tumor cells when compared to normal cells Thus, the objective of this study was to investigate the antiproliferative effect of monastrol in human tumor cell breast adenocarcinoma (MCF-7) and non-tumor breast epithelium (HB4a) MCF-7 and HB4a cells were exposed to monastrol in concentrations of 5, 25, 5, 75 and 1 µM for the cytotoxicity assay (MTT assay) and cell proliferation (Real-Time Cell Analyzer); and at concentrations of 25 and 5 µM for the other tests In flow cytometry are assessed dynamics of the cell cycle (propidium iodide) and induction of apoptosis (Annexin V), as well as for morphological analysis obtaining mitotic and apoptotic index by staining with Hoechst 33342 The mRNA levels of cell cycle gene (P53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B and CDKN1C), the damage indicator (GADD45A) and apoptosis (BAX, BAK, BCL2 and BCLXL) were verified by RT-qPCR In the cytotoxicity assay, monastrol reduced viability only in MCF-7 tumor, compared to the control, from the concentration of 5 uM In real-time cell analyzer was also a decrease in the proliferation of MCF-7 cells, while the HB4a curve showed no change in growth kinetics Monastrol does not induce cell death by apoptosis in any of the cell lines In the analysis of the cell cycle, monastrol (5 µM) increased the population of MCF-7 cells in G1 and G2 / M with a concomitant decrease in S, whereas the cell line HB4a an increase of the G2 / M population and decrease of the G1 Both cells showed increases in mitotic index levels The gene expression analysis showed that monastrol increased 5 fold the levels of mRNA CDKN1A gene in MCF-7 cells and reduced the mRNA levels CDKN1C in lineage HB4a by 2-fold These results suggest that monastrol has higher cytotoxicity on MCF-7 tumor cells compared to non-tumor cells HB4a, making it possible anticancer chemotherapypt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/13169
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenameGenética e Biologia Molecularpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.institutionnameEMBRAPApt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.subjectCélulas cancerosaspt_BR
dc.subjectMamaspt_BR
dc.subjectCâncerpt_BR
dc.subjectCiclo celularpt_BR
dc.subjectGenéticapt_BR
dc.subjectCancer cellspt_BR
dc.subjectBreastpt_BR
dc.subjectCell cyclept_BR
dc.subjectCancerpt_BR
dc.titleAvaliação dos efeitos do monastrol em linhagens celulares humanas de adenocarcinoma de mama (MCF-7) e epitélio mamário (HB4a)pt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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