Investigação sorológica e molecular da paracoccidioidomicose humana e animal sob a perspectiva da nova classificação taxonômica das espécies de Paracoccidioides

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dc.contributor.advisorOno, Mário Augusto
dc.contributor.authorSuguiura, Igor Massahiro de Souza
dc.contributor.bancaItano, Eiko Nakagawa
dc.contributor.bancaCotica, Érika Séki Kioshima
dc.contributor.bancaVilas-Boas, Laurival Antônio
dc.contributor.bancaBaeza, Lilian Cristiane
dc.coverage.extent114 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2026-08-20T18:15:04Z
dc.date.available2026-08-20T18:15:04Z
dc.date.issued2025-05-16
dc.description.abstractA paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença causada pelos patógenos cultiváveis do gênero Paracoccidioides. A reclassificação taxonômica baseada em análises moleculares desse grupo resultou na definição de cinco espécies distintas: P. brasiliensis sensu stricto, P. restrepiensis, P. venezuelensis, P. americana e P. lutzii. Essa nova classificação abriu diversas lacunas no entendimento da micose. Neste estudo, investigamos o panorama atual da PCM em uma região hiperendêmica para a doença, o estado do Paraná, através da análise das notificações oficiais do estado (Capítulo I). Observamos que a PCM apresentou mortalidade superior a outras micoses, demora no diagnóstico e importante subnotificação. Além dos seres humanos, a doença também afeta animais domésticos e silvestres, porém com poucos registros da sua ocorrência na literatura. Considerando a importância epidemiológica local, utilizamos além dos métodos tradicionais, novos métodos para diagnosticar um caso atípico de PCM canina (Capítulo II). Nesse contexto, devido a necessidade do uso de métodos moleculares na identificação desses patógenos, tanto em humanos como em animais, propusemos uma nested PCR para amplificação parcial do gene de alfa tubulina (TUB1) diretamente de amostras biológicas. Utilizamos os produtos dessa reação em técnicas capazes de identificar a maioria das espécies de Paracoccidioides, com ou sem o uso de sequenciamento (Capítulo III). A nested PCR também se mostrou eficaz na amplificação de TUB1 em espécies não cultiváveis do gênero, como Paracoccidioides ceti, agente da paracoccidioidomicose ceti (PCM-C), micose que acomete cetáceos (Capítulo IV). Através da nested PCR foi possível diagnosticar dois casos de PCM-C em golfinhos brasileiros e ainda investigar as diferenças genéticas no grupo a partir da utilização de TUB1. Além da identificação molecular, os métodos sorológicos são amplamente utilizados no diagnóstico da PCM. Dependendo do método empregado, observam-se diferenças significativas nos resultados, de acordo com as espécies de fungos que infectam os pacientes, e o isolado utilizado para a produção dos antígenos. Assim, revisamos a diferenciação sorológica entre as espécies cultiváveis de Paracoccidioides, adotando uma nova abordagem (Capítulo V). Utilizamos diversos isolados dos fungos em infecção experimental murina para avaliar o reconhecimento antigênico, tanto homólogo quanto heterólogo, por meio de ELISA e immunoblotting, nas versões tradicional e por avidez. Foi observado que os antígenos são bastante conservados entre as espécies cultiváveis de Paracoccidioides, não sendo observadas variações consistentes entre elas. Apesar das variações do reconhecimento antigênico entre isolados foi observado, que dentre os antígenos, o de 70 kDa foi reconhecido com maior avidez. Em conclusão, os dados apresentados neste trabalho reforçam a importância da PCM no cenário atual, além de fornecer uma abordagem atualizada com novas metodologias aplicáveis tanto para os agentes cultiváveis quanto não cultiváveis de Paracoccidioides
dc.description.abstractother1Paracoccidioidomycosis (PCM) is a disease caused by cultivable pathogens of the Paracoccidioides genus. The taxonomic reclassification based on molecular analyses of this group led to the definition of five distinct species: P. brasiliensis sensu stricto, P. restrepiensis, P. venezuelensis, P. americana, and P. lutzii. This new classification has opened several gaps in the understanding of the mycosis.In this study, we investigated the current landscape of PCM in a hyperendemic region for the disease, the state of Paraná, through the analysis of official notifications from the state (Chapter I). We observed that PCM presented a higher mortality rate compared to other mycoses, delays in diagnosis, and significant underreporting. In addition to humans, the disease also affects domestic and wild animals, though there are few reports of its occurrence in the literature. Given its local epidemiological importance, we used not only traditional methods but also new approaches to diagnose an atypical case of canine PCM (Chapter II). In this context, due to the need for molecular methods in identifying these pathogens in both humans and animals, we proposed a nested PCR to partially amplify the alpha-tubulin gene (TUB1) directly from biological samples. The products of this reaction were used in techniques capable of identifying most Paracoccidioides species, with or without sequencing (Chapter III). The nested PCR also proved effective in amplifying TUB1 in non-cultivable species of the genus, such as Paracoccidioides ceti, the causative agent of cetacean paracoccidioidomycosis (PCM-C), a mycosis that affects cetaceans (Chapter IV). Using the nested PCR, we were able to diagnose two cases of PCM-C in Brazilian dolphins and also investigate genetic differences within the group using TUB1. In addition to molecular identification, serological methods are widely used in PCM diagnosis. Depending on the method employed, significant differences are observed in results, according to the fungal species infecting the patients and the isolate used to produce the antigens. Therefore, we reviewed the serological differentiation among the cultivable Paracoccidioides species, adopting a new approach (Chapter V). We used several fungal isolates in experimental murine infections to evaluate antigenic recognition, both homologous and heterologous, using ELISA and immunoblotting, in both traditional and avidity formats. It was observed that the antigens are highly conserved among the cultivable Paracoccidioides species, with no consistent variations among them. Despite variations in antigen recognition among isolates, the 70 kDa antigen was recognized with the highest avidity. In conclusion, the data presented in this work reinforce the importance of PCM in the current landscape and provide an updated approach with new methodologies applicable to both cultivable and non-cultivable Paracoccidioides agents
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/19490
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCB - Departamento de Ciências Patológicas
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimental
dc.subjectMicologia
dc.subjectDoenças infecciosas
dc.subjectMedicina veterinária
dc.subjectMicoses sistêmicas
dc.subjectEpidemiologia
dc.subjectDiagnóstico
dc.subjectParacoccidioidomicose ceti
dc.subjectParacoccidioides
dc.subjectNested PCR
dc.subject.capesCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.cnpqCiências Biológicas - Biologia Geral
dc.subject.keywordsMycology
dc.subject.keywordsInfectious diseases
dc.subject.keywordsVeterinary medicine
dc.subject.keywordsSystemic mycoses
dc.subject.keywordsEpidemiology
dc.subject.keywordsDiagnosis
dc.subject.keywordsParacoccidioidomycosis ceti
dc.titleInvestigação sorológica e molecular da paracoccidioidomicose humana e animal sob a perspectiva da nova classificação taxonômica das espécies de Paracoccidioides
dc.title.alternativeSerological and molecular investigation of human and animal paracoccidioidomycosis from the perspective of the new taxonomic classification of Paracoccidioides species
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências Biológicas

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