Participação da IL-33 em modelos de resposta inflamatória inata e dor neuropática em camundongos
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Resumo
Resumo: A IL-33 é um membro da família de citocinas IL-1, que sinaliza via receptor ST2 Essa citocina está envolvida na dor induzida pela resposta imune adaptativa, entretanto, pouco se sabe a respeito do papel da IL-33 em modelos de resposta imune inata e dor neuropática Nesse trabalho demonstramos os mecanismos pelos quais a IL-33 contribui para inflamação inata induzida pela carragenina Além disso, foi investigado o papel da IL-33 em modelo de neuropatia induzido pela injúria por constrição crônica do nervo ciático em camundongos No primeiro momento, avaliamos se a carragenina e a IL-33 eram capazes de induzir a resposta inflamatória em animais BALB/c (selvagem) e deficientes para o receptor ST2 através da avaliação dos parâmetros: edema, atividade de mieloperoxidade, hiperalgesia mecânica, citocinas, expressão de RNA mensageiro e tratamentos farmacológicos inibindo o recrutamento leucocitário (fucoidina), TNFa (infliximab), CXCL1 (anticorpo contra CXCL1), IL-1 (antagonista do receptor da IL-1), endotelinas, receptor ETA (clazosentan) e ETB (BQ788) e ciclooxigenase (indometacina) A fim de avaliar o papel da IL-33 na dor neuropática, a hiperalgesia mecânica também foi avaliada, os níveis de citocinas foram determinados por ELISA, ativação de proteínas foi determinada pelo método de western blot e, além disso, foram utilizadas ferramentas farmacológicas para alvos específicos A injúria por constrição crônica foi induzida por ligação no nervo ciático Diferenças estatísticas foram consideradas significativas para p<5 Os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de São Paulo e Universidade Estadual de Londrina Os resultados demonstraram que a administração de carragenina aumentou a expressão de RNAm para ST2 e IL-33 e a produção de IL- 33 em amostras de pele de pata Além disso, a administração de carragenina na pata induziu edema, hiperalgesia mecânica e atividade de mieloperoxidase, que foi reduzida nos animais ST2-/- em comparação com os selvagens, os mesmos efeitos foram observados pela administração de IL-33 na pata A hiperalgesia induzida pela IL-33 foi reduzida pelo tratamento com fucoidina, sugerindo o papel do recrutamento de leucócitos no efeito hiperalgésico Em animais naïve a hiperalgesia induzida pela IL-33 foi reduzida pelos tratamentos farmacológicos para os seguintes alvos, TNF-a, CXCL1, IL-1, receptores de endotelina e ciclooxigenase, enquanto que a produção de TNF-a, CXCL1, IL-1ß, IL-1 e PGE2, bem como, a expressão de RNAm para prepro-ET-1 induzidos pela carragenina foram dependentes do receptor ST2 A administração combinada de IL-33 e carragenina, em doses submáximas em tratamento único, induziu hiperalgesia, edema, atividade de mieloperoxidase e produção de citocinas de maneira dependente de ST2 Investigando o papel da IL- 33 na dor neuropática, foi demonstrado que a injúria por constrição crônica induz uma produção significativa de IL-33 na medula espinal (L4-L6) e aumento da hiperalgesia durante 2 dias, começando 3 dias após a cirurgia, a qual foi inibida em camundongos deficientes para ST2 A administração intratecal (it) de IL-33 induziu a hiperalgesia de maneira dose-dependente, que foi inibida nos camundongos ST2-/- e TNFR1-/- e pelo tratamento com o antagonista do receptor da IL-1, bem como induziu a produção espinal de TNFa and IL-1ß A hiperalgesia induzida pela administração it de IL-33 foi reduzida pelo tratamento com inibidores de PI3K, mTOR, MAP kinases (p38, ERK e JNK) e NF?B Corroborando, a injúria por constrição crônica induz a ativação espinal de PI3K, AKT, mTOR, MAP kinases e NF?B, verificado pelo método de western blot, o que foi reduzido nos camundongos ST2-/- O tratamento com minociclina e fluorocitrato inibiu a hiperalgesia induzida pela IL-33 e pela injúria por constrição crônica, e nos animais deficientes para o ST2-/-, houve redução na ativação de GFAP e Iba-1 na medula espinal Dessa forma, a sinalização IL-33/ST2 é importante na produção de mediadores inflamatórios contribuindo para a inflamação induzida pela carragenina Além disso, a via IL-33/ST2 medeia a dor induzida pela injúria por constrição crônica pela ativação de mecanismos espinais importantes, que incluem PI3K/AKT, mTORC1 e 2, MAPK (p38, ERK e JNK) e NF?B Esses dados reforçam a importância da sinalização IL-33/ST2 como alvo na dor inflamatória e neuropática
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Palavras-chave
Inflamação, Dor, Neuropatia, Camundongo como animal de laboratório, Patologia experimental, Inflammation, Pain, Neuropathy