Caracterização inter e intra-específica de 45 estirpes elite de rizóbios microssimbiontes do feijoeiro baseada em análise polifásica
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Resumo: Diversas espécies de bactérias do solo do gênero Rhizobium em simbiose com o feijoeiro (Phaseolus vulgaris L), apresentam a capacidade de formar nódulos efetivos e com isso fixar biologicamente o nitrogênio atmosférico (FBN) contribuindo para a redução no uso de fertilizantes nitrogenados nessa cultura No Brasil, programas de pesquisa para seleção de estirpes de rizóbios têm buscado a eficácia e estabilidade das características da FBN Porém, antes de uma avaliação da eficácia dessas bactérias em experimentos de campo, uma caracterização inter e intra específica é quase um exigência Neste sentido, o estudo foi conduzido com o objetivo de realizar a caracterização de estirpes elite utilizando uma abordagem polifásica com base nas análises morfo-fisiológicas e genéticas Nesse estudo, foram utilizadas, 45 estirpes elite de rizóbios microssimbiontes de feijoeiro, provenientes da Coleção de Microrganismos de Interesse do Agronegócio do Laboratório de Microbiologia do Solo do Instituto Agronômico do Paraná e três estirpes de Rhizobium tropici tipo B SEMIAs 477, 48 e 488 (CIAT 899, PRF 81, H 12) autorizadas pelo MAPA para a produção de inoculantes para a cultura do feijoeiro, no Brasil Os dados de morfologia de colônia, produção de ácido e melanina em meios de culturas específicos foram transformados em matriz binária e o agrupamento da dissimilaridade apresentado com base nas diferenças estimadas pela distância euclidiana Através desse agrupamento, as estirpes foram distribuídas em dois grandes grupos, sendo que, o grupo I foi formado por 73% das quais três estirpes IPR-Pv tiveram 1% de similaridade com as estirpes de Rhizobium tropici (CIAT 899, PRF 81 e H 12) Na análise molecular, também, foram utilizadas as estirpes de R tropici tipo A (CFN 299); R leguminosarium bv phaseoli (ATCC14); R etli (CFN 42); R giardini (H 152); R galicum (R62sp) As análises de agrupamento dos produtos da amplificação com primers do RFLP-PCR-16S para análise inter especifica e do REP, BOX A1R-PCR para uma caracterização intra específica das estirpes foram realizadas usando o algoritmo UPGMA e o coeficiente de Jaccard Pela técnica do PCR-RFLP do 16S rDNA foi observado um grupo contendo 34 estirpes IPR-Pv juntamente com as oito do genêro Rhizobium, enquanto a IPR-Pv 89 ficou isolada com baixa similaridade (3%) Através da análise do dendrograma com perfis de DNA obtidos por PCR-BOX, todas as estirpes analisadas apresentaram perfil distinto, com exceção de cinco pares de IPR-Pv que apresentaram 1% de similaridade O agrupamento do PCR-REP com 7% de similaridade foi observado à formação de 2 perfis distintos e dentro desses ocorreram cinco subgrupos com 1% de similaridade Através da análise polifásica verifica se que essas 45 IPR-Pv, embora pré selecionadas para eficácia simbiótica, apresentam alta diversidade feno-genotipica Pelas análises moleculares verifica-se que o BOX-PCR é discriminatório de estirpe caracterizando cada uma, enquanto a do RFLP-PCR 16S RNAr dentro do gênero agrupa espécies
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Palavras-chave
Nitrogênio, Fixação, Microorganismos fixadores de nitrogênio, Feijão comum, Rizóbio, Fixation, Micro-organisms, Nitrogen-fixing, Beans, Nitrogen