Piometra em cadelas: avaliação do proteoma urinário, identificação bacteriana e perfil de suscetibilidade antimicrobiana

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dc.contributor.advisorMartins, Maria Isabel Mello
dc.contributor.authorSilva, Leticia Amanda dos Santos
dc.contributor.bancaSouza, Fabiana Ferreira de
dc.contributor.bancaVilas-Boas, Laurival Antônio
dc.contributor.bancaGiordano, Lucienne Garcia Pretto
dc.contributor.bancaSant'Anna, Marcos Cezar
dc.coverage.extent93 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2026-08-28T13:30:54Z
dc.date.available2026-08-28T13:30:54Z
dc.date.issued2025-08-28
dc.description.abstractPiometra é a infecção uterina que acomete 20 a 25% das cadelas, geralmente de meia idade a idosas. A infecção, causada por bactérias oportunistas, frequentemente causam alterações renais e sepse. Conhecer os agentes infecciosos envolvidos e as alterações renais decorrentes da infecção, auxiliam no entendimento e no tratamento e da doença. O objetivo deste trabalho foi avaliar a proteômica urinária das cadelas no dia da infecção e após o tratamento, além de identificar as bactérias associadas a infecção uterina juntamente com seu perfil de susceptibilidade antimicrobiana. Para o primeiro artigo, foram colhidas urinas de 27 cadelas diagnosticadas com piometra e separadas em grupos, sendo 18 animais não azotêmicos (NAZO) e nove azotêmicos em T1 (dia do diagnóstico) e após mediana de 206 dias, oito cadelas retornaram e realizaram colheita de urina por cistocentese guiada por ultrassom. As amostras foram preparadas, realizada digestão com tripsina e realizado a espectrometria de massas. Para o segundo artigo, foram avaliados 35 conteúdos uterinos de cadelas submetidas a ovariohisterectomia. Realizada cultura bacteriana e teste de resistência com os antimicrobianos: enrofloxacina, amoxicilina com clavulanato, cefalexina, ceftriaxona, cefovecina, imipenem e metronidazol, além do sequenciamento de genes. No primeiro artigo foram identificadas 286 proteínas nos grupos NAZO e AZO, com 18 proteínas diferencialmente abundantes entre os grupos. Dezesseis proteínas foram encontradas em maior abundância no grupo AZO sendo elas Uncharacterized protein (A0A8I3NC47); Prostaglandin-H2 D-isomerase; Lipocalin/cytosolic fatty-acid binding domain-containing protein; Vesicular integral-membrane protein VIP36; Cathelicidin; Keratin 75; Gelsolin (ADF); Trypsin; Uncharacterized protein (A0A8I3NNP2); Cystatin B; Serpin family A member 3; Uncharacterized protein (A0A8I3MXY6), Ig-like domain-containing protein, Cystatin E/M, Profilin e Ig-like domain-containing protein. As proteínas encontradas com maior abundância no grupo NAZO foram: Lysozyme e Uncharacterized protein (A0A8I3P2M2). Em T1 foram encontradas 34 proteínas diferencialmente abundantes sendo 29 upregulated em T1, sendo: uncharacterized protein (A0A8I3MX03), alpha 1 antitrypsin, alpha-1-acid glycoprotein, antithrombin-III (serpin C1), inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain 4, complement factor B, alpha-2-HS-glycoprotein (fetuin-a), clusterin, angiotensinogen (serpin A8), C4A anaphylatoxin, ig-like domain-containing protein, uncharacterized protein (a0a8i3nc47), heparan sulfate proteoglycan 2, cystatin E/M, cadherin-1 (epithelial cadherin), gelsolin (adf/actin-depolymerizing factor), uncharacterized protein (a0a8i3mxy6), plasma retinol-binding protein, beta-2-microglobulin, lysozyme, prostaglandin-H2 D-isomerase, NPC intracellular cholesterol transporter 2, cea cell adhesion molecule 1, ig-like domain-containing protein, vesicular integral-membrane protein (vip36), cystatin B, vitamin D-binding protein (gc-globulin) (group-specific component), lipocalin/cytosolic fatty-acid binding domain-containing protein e ig-like domain-containing protein. As proteínas identificadas em abundância no grupo t2 foram: keratin, type II cytoskeletal 1, cd44 antigen, lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, pepsin a e uromodulin. No segundo artigo os resultados obtidos foram: 4/35 (11,4%) culturas negativas e 31/35 (88,6%) com crescimento bacteriano. Segundo as características morfológicas, tintoriais e degradação da lactose, a identificação sugestiva das colônias isoladas foi de 22/31 (70,9%) amostras cocobacilos Gram-negativos, lactose-positivos, dessas 20 foram identificadas como E. coli., e duas como Klebsiella spp. Das 3/31 (9,6%) Gram-negativas lactose-negativas, uma como Pseudomonas spp. e duas sem identificação. Dos seis (19,5%) cocos Gram-positivos, catalase-negativas, todas foram identificadas como Streptococcus spp. No sequenciamento do fragmento 16S, dos doze isolados, dos três Gram-negativos, lactose-positivo, uma Escherichia coli, uma Klebsiella aerogenes e uma falha de identificação. Dos três Gram-negativos lactose-negativa, foram identificadas uma Pseudomonas aeruginosa e duas Escherichia fergusonii. Dos seis isolados cocos Gram-positivos, quatro foram identificados como Streptococcus canis, um Peptostreptococcus canis e uma sem identificação. No antibiograma, as resistências bacterianas foram de 1/31 (3,2%) para enrofloxacina, 6/31 (19,3%) para cefazolina, 4/31 (12,9%) para amoxicilina com clavulanato, 2/31 (6,5%) para ceftriaxona, 8/31 (25,8%) para cefovecina, 0/31 (0%) para imipenem e 29/31 (93,5%) para metronidazol. É possível concluir, com base em ambos os artigos, que a piometra é uma afecção com potencial lesão renal aguda, com recuperação da função renal e que as bactérias responsáveis pela infecção devem ser caracterizadas e seu perfil de susceptibilidade verificado para evitar uso desnecessário de antibióticos de última geração
dc.description.abstractother1Pyometra is a uterine infection that affects 20–25% of intact bitches, usually middle-aged to older. The infection, caused by opportunistic bacteria, often leads to renal alterations and sepsis. Knowledge of the infectious agents involved and the renal changes resulting from the infection assists in both treatment and understanding of the disease. The aim of this study was to evaluate the urinary proteome of bitches on the day of infection and after treatment, as well as to identify the bacteria causing the uterine infection along with their antimicrobial susceptibility profiles. For the first article, urine samples were collected from 27 bitches diagnosed with pyometra and divided into groups: 18 non-azotemic (NAZO) and nine azotemic (AZO) at T1 (day of diagnosis). After a median of 206 days, eight AZO bitches returned for urine collection by ultrasound-guided cystocentesis. Samples were prepared, digested with trypsin, and analyzed by mass spectrometry. For the second article, 35 uterine contents from bitches undergoing ovariohysterectomy were evaluated. Bacterial culture was performed, along with antimicrobial susceptibility testing using enrofloxacin, amoxicillin with clavulanate, cephalexin, ceftriaxone, cefovecin, imipenem, and metronidazole, as well as gene sequencing. In the first article, 286 proteins were identified in the NAZO and AZO groups, with 18 proteins differentially abundant between groups. Sixteen proteins were found in higher abundance in the AZO group: Uncharacterized protein (A0A8I3NC47); Prostaglandin-H2 D-isomerase; Lipocalin/cytosolic fatty-acid binding domain-containing protein; Vesicular integral-membrane protein VIP36; Cathelicidin; Keratin 75; Gelsolin (ADF); Trypsin; Uncharacterized protein (A0A8I3NNP2); Cystatin B; Serpin family A member 3; Uncharacterized protein (A0A8I3MXY6); Ig-like domain-containing protein; Cystatin E/M; Profilin; and Ig-like domain-containing protein. Proteins more abundant in the NAZO group were Lysozyme and Uncharacterized protein (A0A8I3P2M2). At T1, 34 proteins were differentially abundant, with 29 upregulated: uncharacterized protein (A0A8I3MX03), alpha 1 antitrypsin, alpha-1-acid glycoprotein, antithrombin-III (serpin C1), inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain 4, complement factor B, alpha-2-HS-glycoprotein (fetuin-A), clusterin, angiotensinogen (serpin A8), C4A anaphylatoxin, Ig-like domain-containing protein, uncharacterized protein (A0A8I3NC47), heparan sulfate proteoglycan 2, cystatin E/M, cadherin-1 (epithelial cadherin), gelsolin (ADF/actin-depolymerizing factor), uncharacterized protein (A0A8I3MXY6), plasma retinol-binding protein, beta-2-microglobulin, lysozyme, prostaglandin-H2 D-isomerase, NPC intracellular cholesterol transporter 2, CEA cell adhesion molecule 1, Ig-like domain-containing protein, vesicular integral-membrane protein (VIP36), cystatin B, vitamin D-binding protein (GC-globulin; group-specific component), lipocalin/cytosolic fatty-acid binding domain-containing protein, and Ig-like domain-containing protein. Proteins identified in abundance at T2 included: keratin, type II cytoskeletal 1; CD44 antigen; lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1; pepsin A; and uromodulin. In the second article, results showed that 4/35 (11.4%) cultures were negative, while 31/35 (88.6%) showed bacterial growth. Based on colony morphology, staining, and lactose degradation, 22/31 (70.9%) isolates were suggestive of Gram-negative lactose-positive coccobacilli, of which 20 were identified as Escherichia coli and two as Klebsiella spp. Three isolates (9.6%) were Gram-negative lactose-negative: one Pseudomonas spp. and two unidentified. Among six Gram-positive catalase-negative cocci (19.5%), all were identified as Streptococcus spp. 16S fragment sequencing of twelve isolates identified the following: among three Gram-negative lactose-positive isolates, one Escherichia coli, one Klebsiella aerogenes, and one unidentified; among three Gram-negative lactose-negative isolates, one Pseudomonas aeruginosa and two Escherichia fergusonii; and among six Gram-positive cocci, four Streptococcus canis, one Peptostreptococcus canis, and one unidentified. Antimicrobial susceptibility testing revealed bacterial resistance rates of 1/31 (3.2%) for enrofloxacin, 6/31 (19.3%) for cefazolin, 4/31 (12.9%) for amoxicillin-clavulanate, 2/31 (6.5%) for ceftriaxone, 8/31 (25.8%) for cefovecin, 0/31 (0%) for imipenem, and 29/31 (93.5%) for metronidazole. In conclusion, based on both studies, pyometra is a condition with potential for acute renal injury, which may recover post-treatment. Furthermore, the bacteria responsible for the infection should be properly characterized, and their antimicrobial susceptibility determined, to avoid unnecessary use of last-generation antibiotics
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/19727
dc.languagepor
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCA - Departamento de Clínicas Veterinárias
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência Animal
dc.subjectProteínas urinárias
dc.subjectInfecção uterina
dc.subjectLesão renal
dc.subjectDNA
dc.subjectMultirresistência
dc.subjectCão - Doenças
dc.subjectPiometra
dc.subjectInjúria renal aguda
dc.subjectProteoma urinário
dc.subject.capesCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.cnpqCiências Agrárias - Medicina Veterinária
dc.subject.keywordsUrinary proteins
dc.subject.keywordsUterine infection
dc.subject.keywordsDNA
dc.subject.keywordsMultidrug resistance
dc.subject.keywordsDog - Diseases
dc.subject.keywordsPyometra
dc.subject.keywordsAcute kidney injury
dc.subject.keywordsUrinary proteome
dc.titlePiometra em cadelas: avaliação do proteoma urinário, identificação bacteriana e perfil de suscetibilidade antimicrobiana
dc.title.alternativePyometra in bitches: urinary proteome evaluation, bacterial identification and antimicrobial susceptibility profile
dc.typeTese
dcterms.educationLevelDoutorado
dcterms.provenanceCentro de Ciências Agrárias

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01 - Doutorado - Ciência Animal