Diversidade entre estirpes do gênero Bradyrhizobium avaliada por Multilocus Sequence Analysis (MLSA) e análise polifásica
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Helene, Luisa Caroline Ferraz
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Resumo
Resumo: Bactérias simbióticas fixadoras de nitrogênio, também denominadas popularmente de rizóbios, têm grande relevância agronômica, pois fornecem quantidades significativas de nitrogênio para as plantas e colaboram para a recuperação de solos e ambientes degradados Nos últimos anos, com o avanço das técnicas moleculares, diversos trabalhos têm demonstrado que essas bactérias apresentam uma elevada diversidade genética, resultando em reclassificações taxonômicas e na descrição de novas espécies Apesar de o gene ribossomal 16S (16S RNAr) ainda ser utilizado em análises filogenéticas de procariotos, sua alta conservação não é capaz de revelar diferenças entre espécies de diversos gêneros, incluindo Bradyrhizobium Outras metodologias, como o MLSA (Multilocus Sequence Analysis), estão sendo utilizadas para elucidar esses casos, com bons resultados Neste trabalho, 15 estirpes de Bradyrhizobium sem posicionamento taxonômico claro foram utilizadas em estudos de filogenia e taxonomia com base na técnica de MLSA e análise polifásica Para isso, três genes housekeeping—glnII, gyrB e recA—foram sequenciados e suas sequências foram concatenadas e utilizadas para a construção de uma árvore filogenética Das 15 estirpes, sete agruparam com a espécie Bradyrhizobium pachyrhizi, enquanto as SEMIAS 6159, 645 e 648 ocuparam posições isoladas, e dois grupos (SEMIAS 6399 e 644, e SEMIAS 69, 6387 e 6428) não apresentaram similaridade filogenética com nenhuma espécie descrita Esses grupos merecem estudos mais detalhados, pois apresentam grande potencial de representarem espécies novas As estirpes SEMIA 69 (isolada de Centrosema pubescens), SEMIA 6387 e SEMIA 6428, (isoladas de Acacia spp) foram selecionadas para análises complementares, visando à descrição de uma nova espécie, tendo início um estudo polifásico (análises genéticas, fenotípicas e filogenéticas) O perfil de BOX-PCR agrupou as estirpes com mais de 73% de similaridade entre si, e inferiores a 66% com as espécies de Bradyrhizobium já descritas Os ácidos graxos identificados como principais na SEMIA 69 foram a fração molecular total 8 e a fração individual C19: ciclo ?8c A SEMIA 69 apresentou identidade nucleotídica média do genoma inferior a 91% com todas as estirpes tipo das espécies relacionadas O conteúdo G + C da SEMIA 69 foi determinado em 63,46% Os testes fenotípicos (fontes de carbono utilizadas, características morfológicas, condições de crescimento) foram congruentes entre as estirpes representantes da provável nova espécie Os resultados obtidos confirmam que a técnica de MLSA é eficiente para estudos filogenéticos de procariotos, mostrando ser uma ferramenta segura e rápida de análise da diversidade dos gêneros e identificação de possíveis novas espécies Os resultados suportam a descrição de uma nova espécie de Bradyrhizobium
Descrição
Palavras-chave
Rizóbio, Microorganismos fixadores de nitrogênio, Genética bacteriana, Microorganismos do solo, Filogenia, Rhizobium, Micro-organisms, Nitrogen-fixing, Bacterial genetics