Padronização de protocolo simplificado para recuperação de oocistos de Toxoplasma gondii em hortaliças folhosas.

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dc.contributor.advisorNavarro, Italmar Teodorico
dc.contributor.authorBalbino, Letícia Santos
dc.contributor.bancaFerreira, Fernanda Pinto
dc.contributor.bancaBernardes, Juliana Correa
dc.coverage.extent42 p.
dc.coverage.spatialLondrina
dc.date.accessioned2025-03-07T18:01:24Z
dc.date.available2025-03-07T18:01:24Z
dc.date.issued2024-05-28
dc.description.abstractDevido às características nutricionais, as hortaliças são imprescindíveis à alimentação. No entanto, se não higienizadas de forma adequada, podem servir como via de transmissão de parasitoses, como a toxoplasmose. Sua contaminação pode ocorrer durante o processo de cultivo, adubação, irrigação, coleta, transporte, armazenamento e comercialização. Os oocistos de Toxoplasma gondii são eliminados por felídeos no ambiente, contaminando água e vegetais. Até o momento, não há relato de técnica simplificada e validada para uso em laboratórios. Esse trabalho teve como objetivo padronizar uma metodologia de recuperação de oocistos de T. gondii de hortaliças folhosas. Para a padronização da técnica, foi inoculado 1000 oocistos/mL T. gondii para cada 50g de alface crespa, utilizou-se como soluções extratoras água destilada, salina (NaCl 0,085%), Tween 80 (0,1%), Glicina 1M e Dodecil sulfato de sódio (SDS 0,1%); quanto a homogeneização, realizada de forma mecânica, por agitador de mesa, mixer, ou então de forma manual; também avaliou-se o uso de filtração por gaze; e por fim rotações de centrifugação a 1500 xg e 2100 xg/10min, totalizando 60 protocolos diferentes, em triplicata. Para quantificação e avaliação da eficiência, o DNA das amostras foi extraído por kit comercial e posteriormente realizado qPCR e, PCR para análise da sensibilidade. O protocolo com melhor desempenho foi com o uso da glicina 1M como tampão de eluição, homogeneização manual, ausência de filtração em gaze e centrifugação a 2.100 xg. Com este estudo foi possível determinar um método prático e simplificado para a detecção de DNA de T. gondii em amostras de hortaliças folhosas.
dc.description.abstractother1Due to their nutritional characteristics, vegetables are essential to the diet. However, if they are not properly sanitized, they can serve as a means of transmitting parasites such as toxoplasmosis. Contamination can occur during the cultivation process, fertilization, irrigation, collection, transport, storage and marketing. Toxoplasma gondii oocysts are shed by felids into the environment, contaminating water and plants. To date, there is no simplified and validated technique for use in laboratories. The aim of this study was to standardize a methodology for recovering T. gondii oocysts from leafy vegetables. To standardize the technique, 1000 oocysts/mL T. gondii oocysts/mL was inoculated into each 50g of curly lettuce. Distilled water, saline (NaCl 0.085%), Tween 80 (0.1%), Glycine 1M and Sodium Dodecyl Sulphate (SDS 0.1%) were used as extractant solutions; manual and mechanical agitation was used for homogenization; the use of gauze filtration was also evaluated; and finally centrifugation rotations at 1500 x g and 2100 x g/10min, totaling 60 different protocols, in triplicate. For quantification and efficiency evaluation, DNA from the samples was extracted using a commercial kit and then qPCR and PCR were carried out for sensitivity analysis. The protocol with the best performance was the use of 1M glycine as the elution buffer, manual homogenization, no gauze filtration and centrifugation at 2,100 xg. With this study it was possible to determine a practical and simplified method for detecting T. gondii DNA in leafy vegetable samples.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/18596
dc.language.isopor
dc.relation.departamentCCA - Departamento de Agronomia
dc.relation.institutionnameUniversidade Estadual de Londrina - UEL
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Ciência Animal
dc.subjectTampão de eluição
dc.subjectToxoplasmose
dc.subjectVegetais
dc.subjectProtocolo
dc.subjectViabilidade
dc.subject.capesCiências Agrárias - Agronomia
dc.subject.cnpqCiências Agrárias - Agronomia
dc.subject.keywordsElution buffer
dc.subject.keywordsToxoplasmose
dc.subject.keywordsVegetables
dc.subject.keywordsProtocol
dc.subject.keywordsViability
dc.titlePadronização de protocolo simplificado para recuperação de oocistos de Toxoplasma gondii em hortaliças folhosas.
dc.title.alternativeStandardization of a simplified protocol for recovering Toxoplasma gondii oocysts from leafy vegetables.
dc.typeDissertação
dcterms.educationLevelMestrado Acadêmico
dcterms.provenanceCentro de Ciências Agrárias

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