Envolvimento do estresse nitro-oxidativo durante a progressão da metástase pulmonar experimental de melanoma murino

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dataload.collectionmapped02 - Mestrado - Patologia Experimentalpt_BR
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dc.contributor.advisorArmani, Alessandra Lourenço Cecchini [Orientador]pt_BR
dc.contributor.authorMelo, Gabriella Pasqualpt_BR
dc.contributor.bancaAraújo, Eduardo José de Almeidapt_BR
dc.contributor.bancaPrado, Sara Santos Bernardes Realpt_BR
dc.coverage.spatialLondrinapt_BR
dc.date.accessioned2024-05-01T14:58:37Z
dc.date.available2024-05-01T14:58:37Z
dc.date.created2017.00pt_BR
dc.date.defesa07.04.2017pt_BR
dc.description.abstractResumo: O melanoma é o mais grave dos cânceres de pele devido a sua alta capacidade invasiva Uma vez que o desequilíbrio redox pode modular o comportamento celular, influenciando a resposta do hospedeiro, bem como o crescimento tumoral e sabendo que o melanoma é um câncer altamente sensível a essas mudanças a nível sistêmico e no microambiente tumoral, se torna importante conhecer os fenômenos nitoro-oxidativos envolvidos na instalação e progressão da metástase do melanoma Células de melanoma murino B16F1 foram cultivadas em DMEM 1%SFB e inoculadas 15 células viáveis em 5 ?L de DMEM sem soro em camundongos C57BL/6 machos (8-12 semanas), via endovenosa pelo plexo oftálmico O grupo controle recebeu 5 ?L de DMEM sem soro Os camundongos foram submetidos à eutanasia após 3, 7, 14 ou 21 dias, e os grupos denominados M3, M7, M14 e M21 respectivamente, com n=8 O pulmão foi retirado e feita a contagem de nódulos metastáticos O lobo médio do pulmão direito foi separado para inclusão em parafina e posterior análise imunohistoquímica (VEGF, PCNA e 3-NT), o restante foi armazenado a -8ºC O sangue total foi coletado por punção cardíaca e separados plasma e eritrócitos, o primeiro foi armazenado a -2ºC e o segundo em tampão alsever a 8ºC Foram feitas análises sistêmicas e no pulmão, de parâmetros pró oxidantes (QL e MDA) e antioxidantes (Catalase, GSH e TRAP) e avaliados estatisticamente por One-Way ANOVA e Tukey como pós teste Para analisar a célula tumoral livre de interferência sistêmica ou de outras células, avaliamos parâmetros oxidativos in vitro (MDA, Catalase, GSH e TRAP) em células B16F1 e as mesmas com estímulo da produção de melanina (L-tirosina 17µM/L e NH4Cl 1mM/L, em DMEM 1%SFB) Foi feita uma curva de proliferção após 24 e 48 horas de cultivo e as análises de estresse oxidativo após 48 horas A análise estatística foi realizada com Two-Way ANOVA e Tukey como pós teste, para avaliar proliferação e teste t de estudent não pareado para os parâmetros antioxidantes (p<,5 considerado significativo) Existe um aumento na lipoperoxidação plasmática no estágio mais inicial da doença, com progressiva diminuição do dano oxidativo e aumento de defesas antioxidantes Ao contrário, observamos no microambiente tumoral um aumento da lipoperoxidação e marcação para 3-NT a medida que aumentam os nódulos metastáticos, com diminuição de antioxidantes e aumento progressivo de VEGF como sinalização anigiogenica e PCNA como sinal de proliferação In vitro, houve aumento de proliferação após 48 horas nas células produtoras de melanina com aumento dos antioxidates TRAP, Catalase e GSH, no mesmo grupo Logo, podemos concluir que o aumento do equilíbrio redox na corrente sanguínea favorece a progressão tumoral, enquanto a redução do equilíbrio redox no tecido, causada em parte pela produção de melanina, favorece a sinalização para a proliferação de células de melanoma e crescimento do tumor, ao mesmo tempo em que o aumento de melanina fornece proteção antioxidante para a célula tumoralpt_BR
dc.description.abstractother1Abstract: Melanoma is the most serious of skin cancers due to its high invasive ability Since redox imbalance can modulate cellular behavior, influencing host response as well as tumor growth Therefore knowing that melanoma is a cancer highly sensitive to these changes at the systemic level and in the tumor microenvironment, it becomes important to know the phenomena Nitoro-oxidative factors involved in the onset and progression of melanoma metastasis B16F1 murine melanoma cells were cultured in 1% SFB DMEM and inoculated 15 viable cells in 5µl of serum-free DMEM in male C57BL/6 mice (8-12 weeks), intravenous ophthalmic plexus The control group received 5 µL of serum-free DMEM The mice were submitted to euthanasia after 3, 7, 14 or 21 days, and the groups named M3, M7, M14 and M21 respectively, with n=8 The lung was removed and metastatic nodules were counted The mean lobe of the right lung was separated for paraffin inclusion and subsequent immunohistochemical analysis (VEGF, PCNA and 3-NT), the remainder was stored at -8 ° C Whole blood was collected by cardiac puncture and plasma and erythrocytes separated, the first one stored at -2°C and the second one in alsever buffer at 8°C Were made systemic and lung analyzes of pro-oxidant parameters (QL and MDA) and antioxidants parameters (Catalase, GSH and TRAP) Statistical differences were evaluated by One-Way ANOVA following Tukey’s post-hoc testing In order to analyze the tumor cell in vitro without systemic or other cells influence, we evaluated in vitro oxidative stress parameters (MDA, Catalase, GSH and TRAP) in B16F1 cells and the same ones with stimulation of melanin production (L-tyrosine 17µM/L and NH4Cl 1mM/L, in DMEM 1% FBS) A proliferation curve was made after 24 and 48 hours of culture and analyzes of oxidative stress after 48 hours Statistical analysis was performed with Two-Way ANOVA following Tukey’s post-hoc testing, to evaluate proliferation and unpaired Student's t-test for oxidative stress parameters (p<5 considered significant) There is an increase in plasma lipid peroxidation at the earliest stage of the disease, with a progressive decrease in oxidative damage and an increase in antioxidant defenses In contrast, we observed in the tumor microenvironment an increase in lipid peroxidation and 3-NT labeling as the metastatic nodules increase, with decreasing antioxidants and progressive increase of VEGF as anigiogenic signaling and PCNA as a sign of proliferation In vitro proliferation increased after 48 hours in melanin-producing cells with increased antioxidant TRAP, Catalase and GSH, in the same group Thus, we can conclude that increased redox unbalance in the bloodstream favors tumor progression, while reduction of tissue redox balance, caused in part by melanin production, favors signaling for melanoma cell proliferation and tumor growth, while increasing melanin provides antioxidant protection for the tumor cellpt_BR
dc.description.notesDissertação (Mestrado em Patologia Experimental) - Universidade Estadual de Londrina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.uel.br/handle/123456789/15934
dc.languagepor
dc.relation.coursedegreeMestradopt_BR
dc.relation.coursenamePatologia Experimentalpt_BR
dc.relation.departamentCentro de Ciências Biológicaspt_BR
dc.relation.ppgnamePrograma de Pós-Graduação em Patologia Experimentalpt_BR
dc.subjectMelanomapt_BR
dc.subjectPulmõespt_BR
dc.subjectMetástasept_BR
dc.subjectEstresse oxidativopt_BR
dc.subjectMelaninapt_BR
dc.subjectMetastasispt_BR
dc.subjectOxidative stresspt_BR
dc.subjectLungspt_BR
dc.titleEnvolvimento do estresse nitro-oxidativo durante a progressão da metástase pulmonar experimental de melanoma murinopt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR

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