Ocorrência de HLB e caracterização de 'Candidatus Liberibacter spp.' no estado do Paraná
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Meneguim, Luciana
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Resumo
Resumo: Huanglongbing (HLB) é considerada a principal doença que ocorre na cultura de citros no mundo Três espécies da bactéria são descritas como responsáveis pela doença, ‘Candidatus Liberibacter africanus’, ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’ e ‘Candidatus Liberibacter americanus’ No Brasil, a doença foi detectada pela primeira vez em 24, no estado de São Paulo No Paraná, a primeira ocorrência da doença foi observada em 26 no município de Altônia, na região Noroeste do Estado Os objetivos desse trabalho foram avaliar a incidência do HLB em regiões citrícolas do estado do Paraná, estudar a diversidade genética de ‘Ca Liberibacter asiaticus’ presente nessas regiões, bem como obter isolados da bactéria em meio de cultura Foram avaliadas folhas com sintomas suspeitos de HLB utilizando-se o teste da PCR com ‘primers’ específicos para as três espécies de ‘Ca Liberibacter’ Para o estudo de diversidade genética, foram utilizadas as técnicas de PCR-RFLP com as enzimas de restrição ApoI, HinfI e TaqI e sequenciamento dos genes omp e rplAJ No isolamento de ‘Ca Liberibacter asiaticus’ foram utilizados ramos de plantas de laranja doce cv Valência enxertadas sobre limão Cravo e também plantas de pé-franco da mesma cultivar, infectadas artificialmente Para extração da seiva foi utilizada bomba de pressão de Scholander, onde os ramos foram submetidos a uma pressão de 3, megapascal e a seiva extraída foi coletada e plaqueada sobre os meios de cultura BCYE, PD2+E e LiberA sem adição de NADP As placas foram mantidas em câmara de crescimento a 28 ºC até o desenvolvimento de colônias bacterianas O levantamento da ocorrência de HLB foi realizado no período de agosto de 27 a agosto de 211, onde 728 amostras de citros foram examinadas Destas amostras, 61,5% apresentaram resultado positivo para ‘Ca Liberibacter asiaticus’, sendo essa a única espécie detectada associada ao HLB Foram avaliadas amostras de citros provenientes de 192 pomares de 47 municípios das regiões Norte, Noroeste e Oeste do Estado O HLB foi constatado em amostras de 37 municípios A doença foi diagnosticada em laranja Pêra (5,%), Valência (17,7%), Iapar 73 (16,%) e Folha Murcha (9,2%) Do total de amostras positivas para HLB, 61,3% foram detectadas em copas de laranjas doce enxertadas sobre o porta-enxerto limão Cravo Plantas com idade entre 6 e 1 anos foram as mais avaliadas, correspondendo a 34% do total de amostras positivas Não foi observada diversidade genética entre as amostras paranaenses da bactéria do HLB, tanto pela técnica de PCR-RFLP como por sequenciamento para os dois genes analisados A similaridade genética observada da bactéria que ocorre no Paraná com amostras de outras regiões citrícolas foi de 99 a 1% A presença de ‘Ca Liberibacter asiaticus’ em colônias bacterianas desenvolvidas no meio de cultura PD2+E foi confirmada por PCR e sequenciamento com ‘primers’ específicos para esta bactéria Porém, o sequenciamento do produto de PCR obtido com ‘primers’ genéricos também revelou similaridade de 99% com bactérias não culturáveis e bactérias do gênero Paenibacillus, indicando que ‘Ca Liberibacter asiaticus’ pode estar em associação com outras bactérias nessas colônias bacterianas
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Palavras-chave
Bactérias fitopatogênicas, Aspectos genéticos, Frutas cítricas, Doenças e pragas, Cultura e meios de cultura (Biologia), Genetic aspects, Diseases and pests, Bacteriology, Plants - Phytopathogenic bacteria - Citrus fruits