Navegando por Autor "Santos, Fernando Cezar dos"
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Item Atividade hemolítica e hemaglutinante de células viáveis e antígenos solúveis de Paracoccidioides spp. sobre eritrócitos humanosSantos, Fernando Cezar dos; Itano, Eiko Nakagawa [Orientador]; Mendes, Rinaldo Pôncio; Watanabe, Maria Angélica EharaResumo: Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica na América Latina, é causada pelos fungos termodimórficos P brasiliensis e P lutzii A atividade hemolítica tem sido considerada um importante fator de virulência em diversos patógenos e tem sido detectada com células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade hemolítica e hemaglutinante de células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii e seus antígenos solúveis Inicialmente, células viáveis de P brasiliensis (Pb339) e P lutzii (LDR2) e seus antígenos livres de células (CFA) nativos ou aquecidos, em diferentes concentrações (11, 2, 3, 4, 5, 6,7 células/ml e 15; 75; 37 e 18 mg proteina/ml, respectivamente) foram submetidos ao teste de hemólise Adicionalmente, os componentes solúveis de cultura dos fungos em meios sólidos, CFA (Saboraud com ou sem BHI) e sobrenadantes de cultura dos fungos (ExoAgs) em meios líquidos (RPMI, BHI), coletados a cada três dias por um período de 3 dias também foram avaliados O teste de hemólise foi realizado em placas de 96 poços com eritrócitos humanos (1%) à 37ºC (3 hrs e 5 hrs) e o grau de hemólise foi avaliado por espectrofotometria no comprimento de onda de 55 nm A atividade hemolítica foi observada em ambos os fungos na concentração de 17 células/poço e foi maior com LDR2 quando comparado ao Pb339 (p<,5) Em contraposição, CFA de Pb339 apresentou maior atividade hemolítica que CFA de LDR2 (p<,5) Em ambos, a atividade hemolítica do CFA foi maior em 5 hrs do que em 3 hrs de incubação e também quando a maior concentração foi usada Surpreendentemente, foi também detectada atividade hemaglutinante com ambos os fungos em concentrações menores (16,15,14) Essa hemaglutinação foi detectada em CFA diluído e aquecido de Pb339 ou CFA de LDR2 aquecido, mas não diluído O perfil hemolítico foi similar com antígenos solúveis de Pb339 obtidos de meios sólidos e líquidos, com atividade máxima começando em 9-12 dias de cultura, que foi mantida até a avaliação final No entanto, somente antígenos solúveis de LDR2 crescidos em meio Saboraud apresentaram alta atividade hemolítica nos dias 15-18, que então decresceu Todas as outras fontes de LDR2 apresentaram atividade diminuída durante todos os períodos de cultura avaliados Em conclusão, células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii possuem a habilidade de lisar e aglutinar eritrócitos humanos, mas possivelmente Pb339 é mais eficaz em liberar esse fator em forma solúvel e tanto tempo quanto condições de cultura afetam a produção de fatores hemolíticosItem Polimorfismos intrônicos no gene do fator de transcrição FOXP3 e níveis da IL-10 como biomarcadores de susceptibilidade e prognóstico na oncogênese cervical induzida pelo HPVSantos, Fernando Cezar dos; Oliveira, Karen Brajão de [Orientador]; Watanabe, Maria Angelica Ehara; Kishima, Marina Okuyama; Amarante, Marla Karine; Losi-Guembarovski, RobertaResumo: A infecção persistente pelo papilomavírus humano (HPV) de alto risco (hrHPV) inicia e, em conjunto com outros fatores, promove a carcinogênese na cérvice uterina, a progressão para lesões intraepiteliais escamosas (SIL) e consequentemente para câncer de colo de útero (CCU) Ainda que o vírus seja bem-sucedido em causar infecção produtiva no hospedeiro, sua presença é notada pelo sistema imune, que é hábil em estabelecer respostas epiteliais de defesa eficientes e eliminar o vírus No entanto, ao longo da evolução, o HPV desenvolveu a capacidade de se evadir da resposta imune, modulando a dinâmica imunológica, especialmente de células T, a seu favor Alvo desses mecanismos de evasão são as células T regulatórias (Treg), identificadas pela expressão constitutiva do fator de transcrição forkhead box P3 (FOXP3) Estas células possuem atividade supressora sobre respostas efetoras e contribuem para a persistência da in-fecção e progressão tumoral Neste contexto, variantes genéticas no gene FOXP3 podem alterar seus níveis intracelulares e sua função, estando associadas à diversas doenças humanas Desta forma, este estudo objetivou analisar os polimorfismos genéticos rs2232365 e rs3761548 em mulheres infectadas pelo HPV e portadoras de SIL e mulheres não infectadas livres de lesões e buscar uma possível correlação entre estes polimorfismos e os níveis plasmáticos e cervicais da interleucina 1 (IL-1) A detecção e genotipagem do HPV e genotipagem dos polimorfismos genéticos de FOXP3 foram realizadas através da técnica de reação em cadeia da polimerase seguida de digestão enzimática (PCR RFLP) A dosagem da IL-1 foi realizada pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) de captura O genótipo homozigoto do polimorfismo rs3761548 (A/A) (relacionado à diminuição da expressão de FOXP3) é um bom preditor de proteção na infecção pelo HPV em mulheres (ORAj = 6; IC95% = 36 – 99; p = 49); este genótipo é também um preditor independente de proteção para o desenvolvimento de lesão intraepitelial de alto grau (HSIL) (ORAj = 28; IC95% = 11 – 68; p = 6) Além disso, o genótipo homozigoto (G/G) do polimorfismo rs2232365 (relacionado ao aumento da expressão de FOXP3) mostrou ser um fator de risco independente para a infecção por HPV (ORAj = 21; IC95% = 16 – 415; p = 33) A análise de haplótipos não mostrou associação significativa em nosso estudo Além disso, não foram detectadas diferenças significativas entre os genótipos do FOXP3 e os níveis de IL-1 em nosso estudo Nós sugerimos que a presença de alelos poli-mórficos do gene FOXP3 não afeta a expressão de IL-1 O presente estudo demonstrou, pela primeira vez, associações significativas entre variantes genéticas de FOXP3 e a infecção por HPV e diagnóstico de SIL Estes dados revelam que o uso dos polimorfismos de FOXP3 podem ser úteis na prática clínica como marcadores moleculares de susceptibilidade e prognóstico à infecção pelo HPV e ao câncer de colo do útero, respectivamente