Navegando por Autor "Kian, Danielle"
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Item Atividade imunomoduladora do óleo de copaíba e ácido caurenóico em macrófagos infectados por Trypanosoma cruzi e o efeito antimicrobiano da combinação entre os produtos naturais com benzonidazolKian, Danielle; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi [Orientador]; Oliveira Junior, Admilton Gonçalves de; Nakazato, Gerson; Costa, Ivete Conchon; Tatakihara, Vera Lúcia HidekoResumo: A doença de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, é uma doença tropical negligenciada que ainda apresenta limitações quanto ao tratamento, como o aparecimento de efeitos colaterais graves e eficácia variável Na busca por terapias alternativas, a utilização de produtos naturais e estratégias como a combinação de fármacos representam alternativas para introdução de novos medicamentos para essa doença O trabalho teve como objetivo avaliar o óleo de copaíba e o ácido caurenóico quanto a sua atividade tripanocida e imunomoduladora em macrófagos infectados por T cruzi, além de analisar o efeito combinatório destes produtos naturais com o benzonidazol Ambos os compostos foram capazes de eliminar o parasito, promovendo diminuição significativa da taxa de infecção e proliferação das formas amastigotas de maneira dose dependente A eliminação destas formas intracelulares ocorreu por mecanismos independentes da produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio e das vias relacionadas ao metabolismo do ferro e defesa antioxidante Apesar dos testes mostrarem que o óleo de copaíba e o ácido caurenóico modulam a resposta imune em macrófagos, o efeito tripanocida pode estar ocorrendo devido à ação direta destes compostos sobre o parasito, uma vez que os tratamentos exibiram um perfil anti-inflamatório Quando os compostos foram associados ao benzonidazol observou-se efeito sinérgico contra todas as formas de T cruzi para o óleo de copaíba e para o ácido caurenóico apenas para as formas epimastigotas e amastigotas Em tripomastigotas o efeito da associação foi aditivo As concentrações utilizadas nos testes mostraram efeito antagônico para células LLCMK2, não indicando, portanto, toxicidade Além disso, os tratamentos com os compostos sozinhos ou em combinação com benzonidazol levaram a diversas alterações funcionais e estruturais nas formas epimastigotas, como aumento na produção de espécies reativas, formação de estruturas membranosas e vacuolização no interior das células, peroxidação lipídica entre outras características indicativas de processo autofágico Portanto, nossos resultados mostram que óleo de copaíba e o ácido caurenóico são capazes de eliminar T cruzi, modular a resposta imune e diminuir a concentração de benzonidazol necessária para causar a morte do parasito, o que poderia diminuir a toxicidade deste medicamento, sendo então, uma alternativa promissora no tratamento da doença de ChagasItem Enterococcus faecium resistente à vancomicina isolado de infecção urinária : formação de biofilme e genomaSilva, Lucas Fernando da; Ogatta, Sueli Fumie Yamada [Orientador]; Kian, Danielle; Tavares, Eliandro Reis; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi; Botelho, Natália de Souza; Morey, Alexandre Tadachi [Coorientador]Resumo: Enterococcus são cocos Gram-positivos, comensais em humanos e animais, sendo também encontrados em solo, água e alimentos No entanto, algumas cepas possuem diferentes fatores de virulência e podem causar infecções Atualmente os enterococos estão entre as principais causas de infecções, especialmente em ambientes de assistência à saúde, comumente associadas ao uso de cateteres, à alta morbidade e mortalidade Enterococcus faecium destaca-se enquanto patógeno devido a sua resistência a vários antimicrobianos, inclusive à vancomicina (VREfm: Vancomycin-Resistant Enterococcus faecium), além de sua capacidade de recombinações genéticas e de formar biofilme em superfícies bióticas e abióticas Neste trabalho foi analisado o perfil de formação de biofilme de um isolado clínico de VREfm, em poliestireno e vidro, e realizado o sequenciamento, montagem e anotação do seu genoma A produção de biomassa (coloração com cristal violeta) e a atividade metabólica (redução de XTT) sugerem que o isolado é capaz de aderir rapidamente à superfície de poliestireno e que o período entre 12 e 24 horas compreende a etapa de maior multiplicação microbiana e formação de biofilme As imagens obtidas por microscopia eletrônica de varredura revelaram aumento da densidade celular e alterações no agrupamento das células ao decorrer do tempo, de maneira semelhante em poliestireno e vidro O sequenciamento do genoma revelou a ocorrência de genes relacionados com: resistência a determinados antimicrobianos (eritromicina, estreptotricina, fluoroquinolonas, glicopeptídeos e quaternário de amônio), bombas de efluxo de múltiplos antimicrobianos, beta-lactamases, proteínas de ligação à penicilina, multi-resistência; adesão e formação de biofilme (acm, efafm e esp), autoindutores de quorum-sensing, promotores de agregação (agr); evasão do sistema imune (Leucine-rich protein), invasão de tecidos (hemolisina), capacidade de causar peritonite e endocardite (serina-protease e sortases), e outros associados com patogenicidade Os resultados correlacionaram os genótipos da cepa em relação à capacidade de adesão e formação de biofilme, além da presença de fatores relacionados com resistência e patogenicidade, reforçando a relevância deste clone do ponto de vista clínicoItem Localização diferencial de um antígeno codificado pelo gene Tc8.2 de Trypanosoma cruziKian, Danielle; Lioni, Lucy Megumi Yamauchi [Orientador]; Izumi, Érika; Venâncio, Emerson JoséResumo: Trypanosoma cruzi é um parasito que exibe formas de vida com diferenças morfológicas e funcionais, alternando entre formas replicativas (epimastigota e amastigota) e infectantes (tripomastigota) De fato, a expressão gênica é a chave dessas diferenças Ao contrário de outros eucariotos, as sequências que codificam proteínas estão organizadas em unidades de transcrição policistrônicas, que são convertidos em RNAm monocistrônicos por trans splicing no terminal 5' e poliadenilação na extremidade 3' do transcrito primário Embora trans splicing seja um mecanismo preciso, existem casos em que são utilizados mais de um local aceptor de splicing no interior de uma região intergênica, podendo, portanto, gerar diferentes proteínas a partir de um mesmo gene, ou seja, ocorre um processamento alternativo do transcrito Aqui, nós descrevemos o gene Tc82, que foi isolado de uma biblioteca de cDNA de formas tripomastigota em vetor lambda Zap A sequência desse gene foi analisada em bancos de dados e a região C terminal foi clonada e expressa em sistema Gateway O soro obtido da imunização de camundongos com a proteína recombinante foi utilizado para reagir com extratos proteicos de T cruzi e houve o reconhecimento de polipeptídios de 7 kDa nas formas epimastigotas e de 8 kDa nas formas tripomastigotas Além disso, pôde ser observada uma imunolocalização diferencial da proteína Tc82 nestas duas formas Na forma epimastigota a proteína foi encontrada distribuída em todo citoplasma, enquanto que em tripomastigota essa distribuição ocorreu no núcleo e cinetoplasto Estes resultados sugerem que as proteínas derivadas do gene Tc82 têm funções diferentes e possam estar relacionadas com a fase de desenvolvimento do parasito Para caracterizar esse gene, foi realizado ensaios de Southern blot, indicando que se trata de um gene único ou em poucas cópias e o Northern blot havendo o reconhecimento de transcritos de tamanhos diferentes nas três formas de vida de T cruzi (4,4 kb em epimastigotas e amastigotas e 3, kb em tripomastigotas), o que sugere a ocorrência de splicing alternativo na formação do RNA do gene Tc82