Navegando por Autor "Petroni, Tatiane Ferreira"
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Item Detecção da co-infecção por Paracoccidioides brasiliensis e Leishmania spp em cãesPetroni, Tatiane Ferreira; Ono, Mário Augusto [Orientador]; Itano, Eiko Nakagawa; Costa, Ivete Conchon; Fertonani, Luciane Holsback Silveira; Watanabe, Maria Angelica EharaResumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica prevalente na América Latina, causada pelos fungos termodimórficos P brasiliensis e P lutzii O habitat desses fungos ainda não esta definido e o uso de animais sentinelas poderia contribuir para o esclarecimento do mesmo Considerando que a PCM e a leishmaniose visceral são endêmicas na região de estudo, este trabalho teve como objetivo avaliar a ocorrência de infecção por P brasiliensis em cães incluídos no Inquérito Epidemiológico para Leishmaniose Visceral Canina (LVC) na região de Araçatuba-SP Do total de 3 amostras de soro analisadas (66% positivas e 33% negativas para LVC), 22 (7,3%) foram positivas em ensaio de imunodifusão (ID) para P brasiliensis, das quais todas eram positivas para LVC (teste rápido e ELISA) Ao analisar as amostras positivas na ID (exoantígeno) por Western blotting (gp43 recombinante), 19 (84%) das amostras apresentaram positividade Foi observado uma correlação positiva (r=96) entre as positividades para LVC e PCM Estes dados sugerem uma maior suscetibilidade de cães com LVC ao desenvolvimento da PCM A fim de confirmar a hipótese de co-infecção, um segundo trabalho foi realizado, e de 128 novas amostras de soro canino analisadas, 7 (5,4%) foram positivas na ID para PCM, sendo 6 (85%) positivos para ambas infecções (PCM e LVC) Amostras de tecidos, linfonodos e lesões de pele, de um dos cães soropositivos para ambas infecções foram cultivados em ágar Saboraud com cloranfenicol e analisados por PCR Uma colônia com características macroscópicas de P brasiliensis foi recuperada a partir da cultura da lesão de pele deste cão, e a análise microscópica apresentou leveduras similares a P brasiliensis O novo isolado de P brasiliensis foi confirmado por PCR (genes alfa-tubulina, PbITSE/R e p27) e a co-infecção através da PCR para detecção de minicírculos de k-DNA de Leishmania spp Estes dados confirmam a ocorrência de co-infecção por P brasiliensis em cão com LVCItem Obtenção de gp43 de Paracoccidioides brasiliensis recombinante em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais para gp43 em galinhas poedeiras imunizadas com vacina de DNAPetroni, Tatiane Ferreira; Ono, Mário Augusto [Orientador]; Itano, Eiko Nakagawara; Ogatta, Sueli Fumie YamadaResumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb) É considerada a oitava causa de mortes por doenças infecciosas e parasitárias no Brasil Os testes imunológicos são utilizados tanto para fins de diagnóstico, acompanhamento do tratamento e epidemiologia da PCM A glicoproteína de 43 kDa (gp43) que é o principal antígeno utilizado nos ensaios imunológicos, possui epítopos carboidrato que podem levar a reações cruzadas com soros de pacientes com histoplasmose e Doença de Jorge Lobo A produção de uma gp43 recombinante em E coli poderia minimizar as reações cruzadas, uma vez que esta não é glicosilada No presente trabalho, o gene da gp43 foi clonado no vetor de expressão pET3a+ (Novagen) e transformado em E coli BL21 (DE3) Star O peptídeo de aproximadamente 42 kDa presente no extrato protéico da cultura de bactérias induzidas com IPTG foi reconhecido em Western blot por soro de cão positivo para gp43 Entretanto, a proteína não pôde ser purificada em coluna de afinidade ao níquel Diante disto, foi proposta a produção de uma vacina de DNA contendo o gene da gp43 para imunizar galinhas poedeiras e obter anticorpos policlonais anti-gp43 para utilização em ELISA Assim, o gene da gp43 foi clonado no vetor de expressão em células de mamíferos (pcDNA31), seqüenciado e utilizado na imunização de 3 galinhas poedeiras A produção de anticorpos IgY anti-gp43 foi avaliado por ELISA utilizando gp43 nativa, e foi observado que apenas 1 galinha apresentou aumento nos níveis de anticorpos O presente trabalho mostrou que a vacina de DNA induziu a produção de anticorpos anti-gp43