Navegando por Autor "Milani, Karina Maria Lima"
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Item Uma abordagem sequencial para o desenvolvimento de inoculante para cana-de-açúcarMilani, Karina Maria Lima; Oliveira, André Luiz Martinez de [Orientador]; Moreira, Renata Stolf; Nogueira, Marco Antonio; Hungria, Mariangela; Araújo, Ricardo Silva AzevedoResumo: A identificação de Bactérias Promotoras do Crescimento Vegetal (BPCV) capazes de promover incrementos no desenvolvimento e produtividade de cana-de-açúcar já foi evidenciada, entretanto, ainda não existe inoculante comercial registrado para esta cultura Neste sentido, este trabalho teve como objetivo identificar estirpes de BPCV com alto potencial biotecnológico, para o desenvolvimento de um inoculante para uso em cultivos comerciais de cana-de-açúcar O trabalho foi realizado por uma abordagem sequencial sendo dividido em duas etapas Na etapa 1, foi avaliada a diversidade e posicionamento taxonômico de uma coleção de 69 isolados provenientes de amostras de solo, raiz, tolete e folhas de cana-de-açúcar, coletadas em duas regiões distintas do Paraná, Brasil A identificação dos isolados foi realizada com base no sequenciamento parcial do gene 16S rRNA No total, 44 espécies pertencentes a 17 gêneros foram identificadas, sendo que Burkholderia sp, Pseudomonas sp, Bacillus sp, Enterobacter sp, Klebsiella sp, Pantoea sp, Acinetobacter sp e Rhizobium sp foram encontrados em maior abundância Ainda, verificou-se que as diferenças na distribuição dos gêneros bacterianos foram relacionadas aos nichos ecológicos, origem geográfica, variedades de cana-de-açúcar e meio de cultura utilizados Na segunda etapa, foi utilizada uma estratégia para selecionar as BPCV, usando sementes de sorgo como indicadores de eficiência associativa à cana-de-açúcar Com base nos resultados obtidos em sorgo, 2 bactérias foram selecionadas para avaliação dos efeitos promotores do crescimento sobre o desenvolvimento da variedade RB966928 de cana-de-açúcar, em condições de casa-de-vegetação Essas mesmas estirpes bacterianas foram avaliadas quanto a produção de auxinas e solubilização de fosfatos inorgânicos in vitro, visando identificar os mecanismos potencialmente ativos na promoção do crescimento vegetal Os resultados permitiram identificar 4 bactérias com alto potencial biotecnológico, sendo pertencentes aos gêneros Acinetobacter sp, Pseudomonas sp, Gluconacetobacter sp, e Rhizobium sp Essas estirpes foram avaliadas in vitro quanto a compatibilidade entre elas, e inoculadas em diferentes combinações (7) em três variedades (RB83554, RB867515 e RB966928) de cana-de-açúcar em casa-de-vegetação A utilização conjunta das bactérias proporcionou efeitos significativos no desenvolvimento da cana-de-açúcar Em adição, as estirpes foram avaliadas quanto a diversidade metabólica por meio da análise de utilização de diferentes fontes de carbono Conforme os resultados obtidos, referentes as duas etapas deste trabalho, foi possível verificar que a utilização do sorgo para seleção inicial das bactérias demonstrou-se eficiente, e as estirpes obtidas ao final do estudo são consideradas promissoras para o desenvolvimento de uma formulação inoculante para cana-de-açúcar Um estudo separado das etapas referidas acima foi realizado em condições de campo com objetivo de avaliar a eficiência agronômica, bem como diferentes formas de aplicação, de inoculantes formulados com Azospirillum brasilense e Rhizobium sp O inoculante testado foi eficiente no aumento da produtividade de colmos e teor de sacarose da variedade de cana-de-açúcar RB867515, em ciclo de 13 meses para cana planta Também foi verificada maior eficiência do produto quando aplicado em pós-emergência, em dose única e na ausência de adubação nitrogenadaItem Desenvolvimento de formulação para produção de biomassa de Azospirillum brasilense com alta qualidade fisiológicaMilani, Karina Maria Lima; Oliveira, André Luiz Martinez de [Orientador]; Nogueira, Marco Antonio; Andrade, Diva de SouzaResumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver um meio de cultura para a produção de biomassa celular de Azospirillum brasilense que proporcione uma elevada densidade de células e alta concentração de biopolímeros (exopolissacarídeo e polihidroxibutirato), buscando favorecer a sobrevivência do microrganismo no produto e após sua utilização como inoculante O trabalho foi realizado em duas etapas, sendo que inicialmente foram desenvolvidas quatro formulações de meios de cultura líquidos (MCA1; MCA2; MCA3; MCA4) buscando identificar aqueles com maior potencial para produção de biomassa celular de A brasilense Ab-V5 e exopolissacarídeos (EPS) Em adição aos novos meios desenvolvidos, o meio de cultura FORM15 foi utilizado como referência em todos os ensaios realizados A etapa seguinte teve como objetivo avaliar a qualidade fisiológica das células durante o cultivo nas formulações pré-selecionadas anteriormente (MCA2 e MCA4), através da cinética de crescimento, agregação celular, produção de polihidroxibutirato (PHB), e formação dos grânulos de PHB Também foi avaliada a sobrevivência da bactéria ao armazenamento das formulações MCA2 e MCA4 durante 2 dias, e o escalonamento da produção de inoculante em escala semi-piloto utilizando apenas a formulação controle (FORM15) O meio de cultura MCA4 foi o que apresentou maior potencial de utilização para o desenvolvimento de uma formulação inoculante, pois obteve a maior contagem de Azospirillum (1,7 x 19 UFCmL-1), quando comparado com as demais formulações Em adição, o cultivo da bactéria nesta formulação (MCA4) propiciou a manutenção de células viáveis até 24 h de cultivo, retardando a fase de declínio das bactérias, o que possibilitou uma alta produção de PHB (1,73 gL-1) Com relação ao armazenamento das formulações (MCA2 e MCA4), após 2 dias não foi detectada a contagem de células viáveis em nenhuma delas No entanto, foram realizadas avaliações de microscopia no qual revelaram que as formulações armazenadas tardiamente (72 e 144 h de cultivo) apresentaram um maior número de células vivas Sabendo que a maior produção de EPS e PHB foi encontrada nas células cultivadas por mais tempo, foi possível observar que a presença desses biopolímeros influenciou positivamente na sobrevivência da bactéria durante o armazenamento das formulações O experimento realizado em escala semi-piloto demonstrou maior sobrevivência de A brasilense Ab-V5 na FORM15, apresentando uma fase estacionária de maior duração comparada com o cultivo em agitador