Navegando por Autor "Loyola, Wagner"
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Item Ação protetora de extrato de sementes de Artocarpus integrifolia L. contra infecção por Candida albicans através do aumento das funções de fagócitosLoyola, Wagner; Felipe, Ionice [Orientador]; Silva, João Santana da; Saridakis, Halha Ostrensky; Gaziri, Luis Carlos Jabur; Panagio, Luciano AparecidoResumo: Este trabalho pesquisou os principais efeitos de extrato de sementes de Artocarpus integrifolia (EJ), na fagocitose e morte de Candida albicans, na produção de TNF-a e envolvimento com a sobrevivência dos animais a um inóculo letal do fungo Os macrófagos de animais pré-tratados com EJ por 72 h foram co-incubados 1:5 leveduras de C albicans (CR15) por 3 minutos a 37ºC A eficiência fagocítica foi de 68% de macrófagos fagocitantes na presença de soro, cuja atividade fungicida reduziu 76% do inóculo de C albicans Esta ativação dos fagócitos pode ser explicada pelo aumento significativo na produção de anion superóxido comparado ao de fagócitos de animais controle (PBS) A atividade dos receptores foi pesquisada na presença de Manose (5 mM) e Manana (1mg) ou Laminarina (1mg) A eficiência da fagocitose aumentou significativamente (52%) nos macrófagos de camundongos pré-tratados com JE 72 h antes dos ensaios, contra 2% dos macrófagos controle Este aumento foi reduzido a 34% na presença de bloqueadores do receptor de manose (Manose mais Manana) e para 16% na presença de glucana solúvel (laminarina), um inibidor do receptor Dectina-1 Os macrófagos pré-tratados com JE 72h apresentaram aumento na produção de TNF-a após serem co-incubados com C albicans, por 2h, ação que foi inibida com a presença de laminarina durante os ensaios Neste trabalho, avaliamos também a ação do EJ na proteção contra candidíase, assim, animais pré-tratados 72h com o extrato, apresentaram aumento na produção de TNF-a após 2h de infecção com C albicans e uma redução na concentração do fungo no exsudato peritoneal, fígado, baço e rim durante este tempo Estes resultados sugerem que EJ aumentou significativamente os níveis de TNF-a, a atividade dos receptores de Manose, Dectina-1 e de Complemento, sendo estes processos relacionados com maior atividade fagocítica e candidacida, o que possibilitou 9% dos animais tratados com extrato sobreviverem a um inóculo letal de C albicans versus 2% do controleItem Análise da produção de anticorpos IgY das características histológicas do baço e da medula óssea de galinhas poedeiras inoculadas com venenos de serpentesAndrade, Fábio Goulart de; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Loyola, Wagner; Ramos, Solange de Paula; Itano, Eiko Nakagawa; Pavanelli, Wander RogérioResumo: Acidentes ofídicos são causados principalmente por serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus e tratados pela administração de antissoro de mamíferos Como alternativa a este procedimento, a utilização de anticorpos IgY antiveneno produzidos em galinhas poedeiras tem sido avaliada nos últimos anos Neste trabalho foram realizados dois experimentos No primeiro experimento, foi investigada a participação do baço e da medula óssea na produção de anticorpos IgY em galinhas poedeiras white leghorn (Gallus gallus domesticus) imunizadas com veneno crotálico Amostras de soro e gema foram coletadas durante o experimento, para análise da produção de anticorpos IgY Ao final deste, o baço e a medula óssea dos animais foram coletados e submetidos à análise histológica Os resultados mostraram um aumento dos anticorpos IgY crotálico no soro e na gema, a partir do 32º dia após a primeira imunização Estes níveis permaneceram elevados à medida que foram administradas doses de reforço do veneno usado como antígeno A inoculação de veneno crotálico em galinhas poedeiras induziu a produção de anticorpos IgY, principalmente na polpa branca perielipsoidal do baço e também no espaço extravascular da medula óssea No segundo experimento, galinhas poedeiras foram imunizadas com venenos de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus e observadas durante 367 dias Os anticorpos IgY antiveneno foram coletados no soro e na gema dos ovos e avaliados segundo os seguintes parâmetros: níveis, avidez, padrão de reconhecimento antigênico e eficácia Os níveis de anticorpos IgY antibotrópico anticrotálico produzidos aumentaram significativamente após a segunda imunização e assim permaneceram até o final do experimento Índices significativamente elevados de avidez foram observados para anticorpos IgY antibotrópico no 142º dia e para anticorpos IgY anticrotálico no 232º dia após a primeira imunização Os anticorpos IgY antibotro pico reconheceram antí genos de massa molecular de 25 kDa e 5 kDa, enquanto os anticorpos IgY anticrota lico reconheceram principalmente antí genos de massa molecular de 14 kDa e 3 kDa Os antí genos foram mais bem reconhecidos ao final do perí odo experimental Utilizando amostras de soluções aquosas de anticorpos com concentração proteica de 15 mg/ml verificou-se que a solução contendo IgY antibotrópico apresentou eficiência 29µl/3DL5 e potência ,37mg/ml As amostras de solução aquosa contendo anticorpos IgY anticrotálico apresentaram eficiência 246µl/4DL5 e potência de ,829 mg/ml A produção de anticorpos IgY antibotrópico e anticrotálico pôde ser melhorada mediante administração de sucessivas doses dos venenos durante período de imunização superior a 6 meses, afim de se atingirem níveis de anticorpos e índices de avidez mais elevados A avidez elevada e a maior concentração dos anticorpos IgY antiveneno permitiram a neutralização de componentes tóxicos dos venenos inoculados, impedindo seus efeitos letais, sugerindo que estes anticorpos tenham aplicabilidade no tratamento de acidentes ofídicosItem ArtinM como imunoestimulante de neutrófilos em juvenis de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)Toazza, Caroline Silva; Freitas, Julio Cesar de [Orientador]; Savador, Rogério; Loyola, WagnerResumo: A aquicultura é um dos sistemas de produção que mais cresce no mundo Neste contexto, o Brasil, se destaca como um dos países com grande potencial para a piscicultura, pois além de possuir vasto território pluvial, suas condições climáticas favorecem o implemento de cultivos de peixes A tilápia é uma das principais espécies para a piscicultura nacional Os sistemas intensivos usados na criação de tilápias, caracterizados pela alta taxa de estocagem, associados à práticas de manejo constantes e inadequadas e falhas nutricionais podem alterar a qualidade da água propiciando a ocorrência de doenças A maior causa de perdas econômicas no cultivo de tilápias são as doenças de origem bacteriana como a estreptococose Dentre as principais estratégias para controle da estreptococose está o uso de substâncias antimicrobianas, porém estes quimioterápicos induzem a seleção de bactérias resistentes, além de ser uma fonte de poluição ambiental A utilização de substâncias químicas sintéticas e biológicas, fatores nutricionais, hormônios e citocinas, consideradas imunoestimulantes, favorecem os mecanismos de defesa nos animais, são importantes alternativas na prevenção e controle de patógenos na piscicultura podendo substituir o uso de antibióticos Substâncias biológicas como as lectinas de extratos de plantas, têm apresentado bons resultados como imunoestimulantes, podendo ser encontradas em todos os tecidos vegetais A ArtinM, uma glicoproteína, extraída da semente de jaca (Artocarpus integrifólia), é capaz de induzir a haptotaxia in vivo (em ratos) e in vitro (em células humanas), ativação de macrófagos e aceleração do processo de cicatrização ocular em coelhos A haptotaxia induzida por ArtinM ocorre devido a lectina reconhecer glicanas presentes na superfície de células do sistema imune inato como, neutrófilos, macrófagos, células dendríticas e mastócitos O objetivo deste trabalho foi determinar a ação da ArtinM na haptotaxia de neutrófilos presentes no exsudato peritoneal de 12 juvenis de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) inoculados por via intraperitoneal (ip) com Streptococcus agalactiae Para isto as tilápias foram divididas ao acaso em doze aquários submetidas a quatro tratamentos/grupos (G1: controle; G2: inoculada ip com ArtinM, G3: inoculada ip com S agalactiae; G4: inoculada ip com ArtinM e desafiadas com S agalactiae) Após seis e 24 horas da inoculação do estímulo as tilápias foram sacrificadas e amostras de exsudato peritoneal e sangue do vaso caudal foram coletadas Para a determinação da concentração da ArtinM os resultados obtidos foram analisados pelo teste do Qui-quadrado no nível de 1% de significância, já para a determinação da inoculação experimental e desafio os resultados foram obtidos através do emprego do software SASM-Agri de Canteri et al (21), sendo aplicado o teste de Scott-Knott no nível de 5% de significância Os resultados deste trabalho mostraram que a inoculação ip de 1, µg ArtinM/animal atua na haptotaxia de neutrófilos no exsudato peritoneal de juvenis de tilápias do Nilo Desta forma, ArtinM pode ser uma alternativa na profilaxia de juvenis de tilápias do Nilo inoculadas com S agalactiaeItem Atividade leishmanicida e hepatoprotetora da Concanavalina-A na infecção experimental por L. amazonensisAlvarenga, Daniele Sapede; Costa, Ivete Conchon [Orientador]; Loyola, Wagner; Silva, Suelen Santos daResumo: A leishmaniose é considerada a sexta doença de maior importância pela Organização Mundial da Saúde (WHO) É causada por protozoários flagelados do gênero Leishmania e é responsável por um espectro de desordens em animais e humanos O curso da doença é determinado pela resposta imunológica, no qual citocinas como interferon-? (IFN-?), fator de necrose tumoral- a (TNF-a) e espécies reativas de oxigênio (ROS) representam importantes elementos para controlar a doença Vários estudos têm mostrado o potencial imunomodulador da concanavalina-A (Con-A) em infecções experimentais Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imunológica de camundongos pré-tratados com Con-A ou PBS e infectados por Leishmania amazonensis e verificar se o tratamento é eficiente para modular o curso da infecção Neste estudo, camundongos BALB/c foram pré-tratados intraperitonealmente com Con-A (25µg mL-1 PBS) ou PBS (25µL) por 72h e infectados com 17 promastigotas para avaliar a migração celular, citocinas, produção de NO, ROS e o aspecto histológico do fígado Foi encontrado maior número de linfócitos e macrófagos após o tratamento com Con-A no começo da infecção que no grupo PBS O percentual de macrófagos infectados pré-tratados com Con-A in vivo foi significantemente maior quando comparado com o grupo PBS Macrófagos pré-tratados com Con-A e infectados eliminaram mais Leishmania Um significante aumento da produção de TNF-a e IFN-? também foram observados Encontramos níveis de ROS em 3 minutos após a infecção no grupo Con-A mas não no grupo PBS O número absoluto de células por área de infiltrado no fígado do grupo Con-A foi significativamente reduzido quando comparado ao grupo PBS Nossos dados demonstram que Con-A teve um efeito imunomodulatório na leishmaniose experimental, sugerindo que a estimulação inicial em macrófagos leva ao aumento da eliminação de parasitas devido à produção de NO e ROS no sítio inflamatório, prevenindo injúria hepática na fase crônica da doençaItem Avaliação da especificidade e atividade antifúngica in vitro e in vivo de anticorpos IgY contra dois tipos de morfológicos (hifa e levedura) de Candida albicansChambó, Sandmary Dechechi; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Almeida, Ricardo Sérgio Couto de; Loyola, WagnerResumo: Candida albicans é um micro-organismo comensal da cavidade oral, do trato gastrointestinal e do sistema reprodutor em humanos, onde podem viver sem causar danos ao hospedeiro, a menos que existam condições predisponentes que permitam a ocorrência de infecções superficiais ou sistêmicas Nas últimas décadas tem sido demonstrado que a imunidade humoral pode proteger o hospedeiro contra infecções por C albicans, se anticorpos protetores estão disponíveis em quantidades suficientes A utilização de anticorpos em procedimentos experimentais é amplamente documentada na literatura, demonstrando ser uma poderosa ferramenta em ensaios de diagnósticos e também na imunoterapia de diversas patologias A IgY é uma classe de imunoglobulina encontrada em aves e sua obtenção e purificação a partir do ovo de galinha é uma importante opção aos métodos tradicionais de produção de anticorpos que utilizam mamíferos Assim, anticorpos IgY, estão sendo estudados como uma alternativa para a produção de anticorpos para imunoterapia e imunodiagnóstico de doenças Nosso objetivo foi produzir e avaliar a efetividade de anticorpos IgY específicos, utilizando a cepa de C albicans SC5314 para a produção dos anticorpos em galinhas poedeiras (White Leghorns) Para o inóculo de leveduras e hifas, o fungo foi fixado com timerosal e inoculado no músculo peitoral dos animais Após a quarta inoculação, os ovos foram coletados e os anticorpos foram isolados da gema do ovo Para avaliar a efetividade dos anticorpos produzidos, nós realizamos um ensaio de inibição do fungo e um modelo invertebrado de infecção (Tenebrio molitor) Um inóculo de 5 x 15 leveduras por larva foi capaz de matar 1 % das larvas em 12 horas de incubação a 37°C, enquanto que com a co-inoculação de 1µg de anticorpos IgY anti-levedura ou anti-hifa proporcionaram uma sobrevivência de 16,66% e 33,33%, respectivamente, após 72 horas de infecção Nossos resultados demonstram que os anticorpos produzidos possuem uma atividade protetora in vivo contra a infecção pelo fungo patogênico C albicans, abrindo o caminho para o desenvolvimento de novas terapiasItem Efeito da via de inoculação e da dose do antígeno proteíco (IgG humana) na produção de anticorpos IgY em galinhas de linhagem de posturaMontini, Michele Pagliari Oliveira; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Loyola, Wagner; Itano, Eiko NakagawaResumo: Nos últimos anos diversos estudos têm investigado a utilização de anticorpos IgY de galinhas poedeiras em reações de imunodiagnóstico e na imunoterapia Esse grande interesse é decorrente das vantagens dos anticorpos IgY em relação aos anticorpos produzidos em mamíferos como, por exemplo, a produção com métodos menos invasivos e de baixo custo O objetivo desse estudo foi investigar o efeito da dose e da via de inoculação do antígeno sobre a produção e a avidez de anticorpos IgY em galinhas de postura Gallus gallus Para avaliar o efeito da dose de antígenos os animais foram inoculados com 2, 2 e 2 µg de IgG humana Para avaliação do efeito da via de inoculação, os animais formam inoculados com 2 µg do antígeno pelas vias intramuscular (IM), intradérmica (ID) e subcutânea (SC) Os níveis e os índices de avidez dos anticorpos séricos anti-IgG humana foram avaliados por ELISA indireto Os resultados foram submetidos a análise estatística e valores de p < ,5 foram considerados significativos Os resultados obtidos mostram que há a produção de níveis significativos de anticorpos com qualquer uma das doses utilizadas Contudo, há uma diferença significativa nos níveis de anticorpos produzidos entre as doses 2 e 2 µg, As diferentes doses do antígeno não resultam em diferenças significativas nos índices de avidez As vias ID e SC resultam em níveis de anticorpos significativos já após a 3ª imunização Após a 5ª e 7ª imunizações todas as vias resultam em níveis significativos de anticorpos específicos Não há influência da via de inoculação do antígeno sobre o índice de avidez dos anticorpos Por outro lado, o índice de avidez é influenciado diretamente pelo número de inoculações Estes resultados mostram que a produção de níveis significativos de anticorpos específicos contra antígenos purificados podem ser obtidos com doses tão baixas como 2 µg de modo independente da via e que o número de inoculações influência diretamente no índice de avidez dos anticorpos obtidosItem Efeito de concanavalina-A no perfil de citocinas e atividades fagocítica da CandidaCarvalho, Paula Galdino Cardin de; Felipe, Ionice [Orientador]; Furlaneto, Márcia Cristina; Loyola, Wagner; Costa, Ivete Conchon [Coorientadora]Resumo: Candida albicans é o patógeno mais comum nas candidíases cutâneas e da orofaringe, porém infecções causadas por espécies não albicans têm aumentado em número e em importância O reconhecimento do fungo invasivo pelo sistema imune inato é o primeiro passo para a ativação de uma resposta imunológica rápida Em estudo prévio, nosso grupo verificou que 1% dos camundongos sobreviveram à dose letal de Candida albicans após pré-tratamento com concanavalina-A (Con-A) por três dias Neste trabalho verificamos maior índice fagocítico nos macrófagos de camundongos tratados com PBS para Candida glabrata Houve aumento na atividade fagocítica, candidacida e produção de TNF-a por macrófagos de camundongos pré-tratados com Con-A tanto para Candida albicans como para espécies não albicans As espécies C albicans e C tropicalis apresentaram maior transição para a forma filamentosa Isto contribui para o conhecimento de características distintas de patogenicidade e a resposta imunológica desenvolvida frente a estes isolados Este trabalho também propôs investigar se o tratamento pode mediar uma resposta imune adaptativa envolvendo células TH17 Um aumento significante nos níveis de IL-17 6h após infecção com C albicans foi observado e mantido até 18h no grupo Con-A, enquanto em camundongos controle, foi verificada uma redução dessa citocina Correlacionado à produção de IL-17, no grupo tratado com Con-A, a migração de neutrófilos aumentou 6h após infecção, atingindo o pico as 18h Níveis de TGF-ß aumentaram significativamente 2h após infecção em camundongos tratados com Con-A Macrófagos estão envolvidos no processo, fagocitando maiores números de leveduras, e foram ativados atráves da produção de TNF-a e interferon- ? em níveis significantes 2 horas após infecção Deste modo, eles provavelmente são mais capazes de matar e processar antígenos de Candida, sinalizando uma resposta imune adaptativa Macrófagos dos controles não evitam a transição de leveduras em hifas e são parcialmente destruidos, como mostrado em microscopia eletrônica de varredura Estes resultados sugerem que o tratamento com Con-A facilita o desencadeamento de respostas TH17 e TH1 via produção de IL-17 e IFN-?, levando a resolução da infecção por C albicansItem Produção e aplicação de anticorpos IGY anti-nucleoproteína para detecção do vírus influenza A em suínosSilva, Miriele Caroline da; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Ono, Mário Augusto; Itano, Eiko Nakagawa; Fernandes, Eduardo Vignoto; Loyola, WagnerResumo: Os anticorpos são importantes ferramentas em testes de diagnóstico A utilização de anticorpos IgY apresenta diversas vantagens em relação aos anticorpos de mamíferos e vários estudos mostram sua aplicação em técnicas de imunodiagnóstico Assim, esse trabalho teve como objetivo produzir anticorpos IgY anti-nucleoproteína do vírus influenza A (IAV) e avaliar sua aplicação na detecção do vírus IAV por imunocitoquímica (ICQ) e imunohistoquímica (IHQ) Para tanto, galinhas poedeiras da linhagem White Leghorn foram inoculadas com 2 µg da nucleoproteína (NP) nos dias 1, 14, 28, 42, 84, 126 e 168 do experimento Sete dias após a 3ª, 5ª e 7ª inoculação, os ovos foram coletados e os anticorpos IgY foram extraídos por precipitação com sulfato de amônio Os títulos e a especificidade dos anticorpos purificados foram determinados por ELISA, western blotting, ICC e IHC As galinhas poedeiras inoculadas com a proteína NP produziram altos níveis de anticorpos específicos anti-NP após a 7ª inoculação Além disso, foi detectada uma coloração positiva em células MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) infectadas com IAV e incubadas com anticorpo IgY anti-NP No entanto, em tecidos pulmonares de suínos infectados não foi observada nenhuma coloração através do teste IHC Os dados obtidos mostraram que os anticorpos IgY anti-NP purificados das gemas de ovos se ligam especificamente ao IAV, com o reconhecimento dos principais subtipos de vírus circulantes em suínos (H1N1, H1N2 e H3N2), reforçando sua utilidade no diagnóstico de IAVItem Utilização da imunização passiva com anticorpos anti-Streptococcus agalactiae na proteção de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)Carandina, Leticia; Freitas, Julio Cesar de [Orientador]; Garcia, João Luis; Loyola, WagnerResumo: A piscicultura é uma atividade em amplo crescimento em todo mundo O Brasil destaca-se nesta atividade pelo seu vasto território e condições climáticas favoráveis para o cultivo de peixes A tilápia é uma das principais espécies cultivadas no Brasil, pois apresenta diversas qualidades, o que estimula o desenvolvimento de sistemas intensivo de criação, caracterizado por altas densidades de estocagem e práticas de manejo constantes, causando estresse aos peixes e propiciando o desenvolvimento de doenças As maiores perdas econômicas na criação de tilápias são causadas por doenças de origem bacteriana, entre elas a estreptococose, tendo como principal forma de tratamento, o uso de antimicrobianos Entretanto, o uso indevido destes quimioterápicos pode levar a seleção de bactérias resistentes, além do impacto ambiental pela contaminação de corpos hídricos Métodos profiláticos tornam-se uma importante ferramenta para o controle da estreptococose e surgem como alternativa ao uso dos antimicrobianos Diferentes vacinas inativadas foram desenvolvidas para uso comercial em diversos países, incluindo o Brasil, com a utilização de uma vacina contra Streptococcus agalactiae Além das vacinas, estudos sobre a imunização passiva estão sendo realizados e vem demonstrando eficiência na proteção contra diferentes bactérias O objetivo deste trabalho foi avaliar a transferência passiva de anticorpos anti- S agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) Para isto, 36 tilápias foram distribuídas em quatro aquários, sendo dois para o grupo controle e dois para inoculação intraperitoneal (ip) da DL 5 para produção de anticorpos anti- S agalactiae No 21° e 28° dia foi coletado sangue para obtenção do soro hiperimune utilizado na transferência passiva Em seguida, 3 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos (GI: controle; GII: imunizada ip com o soro hiperimune- inativado; GIII: imunizada ip com o soro hiperimune não- inativado) Após 48 horas e sete, 14, 21, 28 e 35 dias foram realizadas coletas de sangue para titulação de anticorpos anti- S agalactiae utilizando o teste de aglutinação direta Para avaliar a sobrevivência outras 3 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos (GI: controle; GII: imunizada ip com o soro hiperimune- inativado; GIII: imunizada ip com o soro hiperimune não- inativado) Após 48 horas da inoculação, as tilápias foram desafiadas ip com S agalactiae e monitoradas duas vezes ao dia, por um período de 35 dias, para acompanhar a mortalidade Os resultados deste trabalho mostraram que os títulos séricos de anticorpos foram detectados pela aglutinação direta até o 21° dia póstransfer ência passiva, e neste mesmo período houve uma proteção de 8% entre os grupos imunizados com soro- inativado e soro não- inativado contendo anticorpos anti- S agalactiae, após desafio com S agalactiae Ao final do experimento, o grupos soroinativado e soro não- inativado apresentaram 6 e 8% de proteção, respectivamente, enquanto que no grupo controle a mortalidade foi de 1%