Navegando por Autor "Girotto, Larissa"
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Item Caracterização in silico e in vivo do promotor do gene galactinol sintase de Coffea sppGirotto, Larissa; Pereira, Luiz Filipe Protasio [Orientador]; Molinari, Hugo Bruno Correa; Vilas-Bôas, Laurival Antônio; Cação, Sandra Maria Bellodi; Ivamoto-Suzuki, Suzana Tiemi; Santos, Tiago Benedito dos [Coorientador]Resumo: O café, é uma das mais importantes commodities agrícolas, sendo o Brasil seu maior produtor e exportador As mudanças climáticas globais têm causados danos a produtividade agrícola cafeeira com impactos econômicos e sociais, incluindo a redução de áreas disponíveis para o plantio de café Uma das alternativas biotecnológicas para resolver esse problema é produção de cafeeiros geneticamente modificados e tolerantes a estresses abióticos Diante desse cenário foi investigado o potencial do promotor da galactinol sintase (GolS) do gênero Coffea, que catalisa a primeira etapa da via de síntese dos oligossacarídeos da família da Rafinose, cujo acúmulo ocorre em resposta a estresses abióticos Entender a arquitetura dos promotores de café, tornou-se fundamental para modular a regulação da expressão gênica em períodos de estresse abióticos 1 promotores de GolS foram encontrados nos genomas públicos disponíveis de Coffea spp Estes apresentaram 12 diferentes tipos de cis-elementos que regulam a resposta gênica e são induzidos por estresses ambientais Os que mais se destacaram foram ARE (indução anaeróbica), ABRE e MYB (resposta do Ácido abscísico - ABA) e STRE (presente nos promotores de genes que são regulados durante o estresse) Após a caracterização dos promotores, um promotor GolS, isoforma de Coffea canephora (Cc), foi selecionado e clonado com o objetivo de verificar a sua expressão em experimentos de estresse abiótico induzido O promotor CcGolS3 fusionado ao gene repórter da ß-glucuronidase (GUS) foi utilizado para transformar Arabidopsis thaliana Para analisar a atividade deste promotor, as plantas transformadas foram submetidas a estresses hídrico, salino e de temperatura A atividade do gene GUS foi analisada histoquimicamente e por RTqPCR A coloração histoquímica do gene repórter GUS foi verificada em todos os tecidos de A thaliana que possuiam a construção pCcGolS3::GUS, provavelmente devido a uma atividade leaky do promotor As análises de RT-qPCR do promotor de CcGolS3 evidenciou o aumento no número de transcritos de GUS em plantas sob estresse hídrico, salino e de frio, mesmo com a presença do leaky, comportando-se como um promotor do tipo estresse-induzido e demonstrando o potencial uso do mesmo em projetos futuros de transformação de plantasItem Prospecção in silico e avaliação da expressão de genes associados ao teor de proteína em grãos de sojaJoaquim, Pamela Isaely de Lima; Henning, Liliane Marcia Mertz [Orientador]; Molinari, Mayla Daiane Corrêa; Marin, Silvana Regina Rockenbach; Girotto, Larissa; Molinari, Mayla Daiane Corrêa [Coorientadora]Resumo: A soja é a principal fonte de proteína vegetal para produção de ração animal Mas para ser utilizada para tal finalidade, o teor de proteína mínimo do grão deve atingir no mínimo 35% Do ponto de vista genético, o que se observa é que ao longo dos anos há uma redução no teor de proteína do grão de soja Assim, em algumas situações, esse teor mínimo não é alcançado Entender os mecanismos genéticos envolvidos no controle dessa característica pode ser útil para o desenho de estratégias biotecnológicas que visem o aumento do teor de proteína no grão de soja Dessa forma, este trabalho visa identificar genes que possam estar associados ao teor de proteína dos grãos de soja O enfoque do trabalho foi voltado a identificar os transportadores de compostos nitrogenados que atuem especialmente em sementes inteiras, tegumento e legume Os resultados do transcriptoma foram validados por meio de PCR em tempo real, nas cultivares BRS 232 e BRS 284, com alto e baixo teor de proteina, respectivamente Foram encontrados 76 genes transportadores de compostos nitrogenados em três bibliotecas de RNA-Seq A partir das análises in silico dos transcriptomas, foram selecionads sete genes, validados por RT-qPCR nas fases de 25-1mg, 1-2mg e 4-5mg Em relação a cultivar de calibração BRS 284, é possível observar que apenas os genes AAP7, AVT3, CAT9 e UMAMIT25 apresentam-se up-regulados, em todas fases de desenvolvimento da semente, na cultivar de maior teor proteico (BRS 232) Em legume, os únicos genes que se apresentaram superexpresso em duas fases, foram o gene CAT9 e o gene UMAMIT25 O gene CAT9 apresentou up-regulação nas fases de 25-1mg e 1-2mg O gene UMAMIT25 apresentou up-regulação em legume de 1-2mg e 25-45mg A superexpressão dos genes UMAMIT25 e CAT9, em futuros estudos, podem acarretar na solução da correlação negativa entre proteína e produtividade