Navegando por Autor "Fernandes, Eduardo Vignoto"
Agora exibindo 1 - 7 de 7
Resultados por página
Opções de Ordenação
Item Análise da atividade sinérgica entre beta-lactâmicos e anticorpos IgY específicos contra Pseudomonas aeruginosa multirresistentesSanches, Renata Fernandes; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Paula, Suelen Balero de; Fernandes, Eduardo VignotoResumo: Pseudomonas aeruginosa é um bacilo gram-negativo responsável por infecções hospitalares A emergência de bactérias multirresistentes, como P aeruginosa, não é acompanhada pela descoberta de novas classes de antimicrobianos que possam combater de modo efetivo e seguro as infecções causadas por esses patógenos A imunoglobulina Y (IgY), obtida a partir da gema do ovo de galinhas, é considerada uma importante ferramenta tecnológica na pesquisa e na imunoterapia Anticorpos IgY tem propriedades antimicrobianas já comprovadas em estudos in vitro sendo seu uso investigado como adjuvante em terapias profiláticas Tendo em vista a importância clínica de P aeruginosa multirresistentes aos antimicrobianos, este estudo teve como objetivo avaliar a ação sinérgica entre os anticorpos IgY anti-P aeruginosa e antimicrobianos pertencentes a classe dos beta-lactâmicos Para isso, os anticorpos IgY foram obtidos a partir do método de precipitação com sulfato de amônia Em seguida, os anticorpos IgY foram esterilizados, quantificados pelo método de Bradford e sua pureza investigada por SDS-PAGE 1% As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) dos beta-lactâmicos imipenem, meropenem e ceftazidima foram obtidas pelo método de microdiluição em caldo e a atividade antimicrobiana dos anticorpos IgY através do teste de inibição Em seguida, realizou-se o teste de sensibilidade in vitro a antimicrobianos em combinação com IgY Os anticorpos IgY específicos anti-P aeruginosa produtora de SPM-1 apresentam atividade antimicrobiana a partir de 1,25 mg/ml e anticorpos IgY anti-P aeruginosa produtora de VIM-2 apresentam melhor atividade antimicrobiana a partir de 2,5 mg/ml Quando avaliada a atividade sinérgica entre anticorpos IgY e cada beta-lactâmico selecionado, observou-se sinergismo nos momentos 48 e 72 horas Concluímos que existe uma ação sinérgica entre anticorpos IgY específicos contra P aeruginosa e que novos estudos devem ser feitos para investigar os mecanismos associados a essa açãoItem Análise histológica do íleo de ratos Wistar suplementados com ovoprodutosDamasco, Kamila Falchetti; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Kwasniewski, Fábio Henrique; Fernandes, Eduardo VignotoResumo: O íleo e suas placas de Peyer (PPs) fazem parte do tecido linfoide associado ao intestino (GALT), um componente do tecido linfoide associado à mucosa que pode ser subdividido em GALT indutor e GALT efetor O primeiro induz a resposta imune local e, o segundo protege o intestino contra a invasão microbiana Apesar disso, o trato intestinal representa uma importante porta de entrada de patógenos Nesse contexto, a IgY, imunoglobulina presente na gema de ovos, vem sendo investigada Alguns estudos relataram que os anticorpos IgY têm a capacidade de aumentar a relação da altura das vilosidades e profundidade das criptas, reduzir a quantidade de microrganismos patogênicos, reduzir a quantidade de folículos linfoides jejunais e linfócitos T nas PPs e, estimular a produção de anticorpos contra a IgY Diante do potencial antimicrobiano e imunomodulador da IgY e, da rica composição nutricional dos ovos integrais, empresas alimentícias têm investido na comercialização de ovoprodutos Estes, segundo os fabricantes, são constituídos de pó de ovo e caracterizados como suplementos dietéticos hiperimunes No entanto, os efeitos da sua administração a organismos saudáveis ainda é desconhecido Diante disso, o objetivo desse estudo foi analisar os efeitos da administração oral de dois ovoprodutos sobre o íleo e PPs de ratos Wistar fêmeas saudáveis Como controle foram utilizados ovos comerciais não hiperimunes secos por spray drying Ambos os ovoprodutos e os ovos comerciais foram avaliados quanto a composição centesimal, o perfil proteico, a presença e reatividade dos anticorpos IgY e a qualidade microbiológica Os ratos Wistar saudáveis foram alimentados pela via oral com 13 mg dos ovoprodutos ou ,5 mL de PBS durante 14 dias e, induzidos a eutanásia Após a laparatomia, foram quantificadas as PPs do íleo dos animais e coletados uma placa de Peyer e 1,5 cm do íleo de cada animal As fezes coletadas antes e depois da suplementação foram processadas para a análise da presença de IgA anti-IgY e os tecidos coletados para a análise morfométrica Os resultados obtidos demonstraram que os ovoprodutos contemplam as características descritas pelos fabricantes A suplementação com os ovoprodutos não alterou a espessura das camadas do íleo O ovoproduto 1 e o ovo comercial aumentaram a quantidade de folículos linfoides nas PPs e a IgY não foi imunogênica ao modelo experimental utilizado Portanto, a suplementação alimentar via oral de ratos Wistar saudáveis com os ovoprodutos não causou prejuízos ao íleo e a suplementação com os ovoproduto 1 e o ovo comercial imunoestimulou as PPs do íleo dos animaisItem Avaliação da resposta imune humoral e análise comportamental de ratos Wistar submetidos a natação forçada e tratados com fluoxetinaFernandes, Eduardo Vignoto; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Moreira, Estefânia Gastaldello; Verri Junior, Waldiceu AparecidoResumo: A fluoxetina é amplamente utilizada para tratamento de transtornos comportamentais O teste do nado forçado é um modelo experimental de estudo da depressão em ratos, no qual drogas antidepressivas revertem o comportamento passivo de flutuação em repetidas imersões em água O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da fluoxetina no comportamento do teste do nado forçado e sobre a imunidade Primeiramente, foi investigado o efeito do teste de nado forçado em relação ao tratamento com fluoxetina (3mg/kg) ou salina, durante 11 dias Neste estudo os animais tratados com fluoxetina apresentaram menor produção de anticorpos anti-hemácias e tempo de flutuação, e maior tempo de nado Os resultados sugerem que a fluoxetina atenua o desespero comportamental e modula a produção de anticorpos A seguir, foi analisado o efeito da fluoxetina na imunidade e no comportamento em ratos Wistar submetidos a natação forçada Ratos Wistar machos (n=72) foram distribuídos em oito grupos (estressados salina não imunizados, estressados salina imunizados, estressados fluoxetina não imunizados, estressados fluoxetina imunizados, não estressados salina não imunizados, não estressados salina imunizados, não estressados fluoxetina não imunizados, não estressados fluoxetina imunizados) Os animais foram submetidos ao estresse de nado forçado e receberam ip 1 mg/kg/dia de fluoxetina ou salina trinta minutos após o termino da sessão de nado forçado, do primeiro até o 24ª dia de estudo No 5º, 1º e 25º dia de estudo, ao terminarem o teste de nado forçado, foi coletado aproximadamente 1 mL de sangue por punção cardíaca em tubos, contendo 5 µL de EDTA 5%, após os testes de nado No 5º e 2º dia os animais pertencentes aos grupos imunizados foram inoculados ip com 25 µL de solução de hemácia de carneiro a 2,5% A avaliação da produção de anticorpos (IgM, IgG2a e IgG1) foi avaliado por ELISA Para análise comportamental, os animais foram filmados durante os primeiros cinco minutos do 1º e 25º dia do experimento Analisando-se o tempo que os animais flutuam, nadam e escalam no cilindro Em relação à produção de anticorpos foi observado um efeito imunossupressor da fluoxetina sobre a produção de IgG1, IgM e IgG2a O IgG1, também foi suprimido pelo estresse Entretanto, a interação destes fatores, reverteu a imunossupressão observada, apenas para o IgG1 A fluoxetina promoveu o aumento do tempo de flutuação e redução de tempo de escalada, sugerindo que o tratamento não teve efeito na redução do estresse crônico neste protocolo Concluímos que a droga não diminuiu o comportamento de estresse dos animais em protocolo de estresse crônico A droga utilizada isoladamente apresenta efeito supressor sobre a imunidade humoral, mas não inibe a produção de anticorpos quando associada ao estresseItem Influência do estresse crônico na imunidade humoral de ratos Wistar exercitadosFernandes, Eduardo Vignoto; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Itano, Eiko Nakagawa; Netto, Eduardo Ferreira de Carvalho; Kwasniewski, Fábio Henrique; Ramos, Solange de Paula; Estanislau, Célio Roberto [Coorientador]Resumo: O exercício físico (EF) prescrito de forma adequada promove benefícios à saúde como controle do peso corporal, proteção contra o surgimento de doenças cardíacas e melhoria do sistema cardiorrespiratório, prevenção contra o diabetes, hipertensão e hipercolesterolemia e contribui na regulação imunológica Por outro lado, o estresse crônico, além de induzir doenças comportamentais, é um fator de risco para doenças inflamatórias, hipertensão arterial, doenças cardiovasculares, obesidade, diabetes, aterosclerose e câncer Além disso, as respostas do organismo a um mesmo estressor são dependentes do sexo Dessa forma, objetivo do presente estudo foi investigar a influência do chronic variable stress (CVS) na imunidade humoral de ratos Wistar exercitados Ratos Wistar fêmeas e machos foram divididos em quatro grupos: Controle (C); Exercício (E); Estresse (S); Exercício e Estresse (ES) Os grupos E e ES foram exercitados por seis semanas, na primeira semana foi realizada a adaptação ao procedimento de nado (iniciado com 2 minutos e acrescentado 5 minutos/dia até o tempo de 4 minutos) A intensidade do nado foi controlada por meio de cargas atadas na região torácica dos ratos O ajuste de carga foi realizado semanalmente, respeitando a variação do peso corporal de cada animal Na segunda semana foi iniciada a utilização de sobrecarga (2 % do peso corporal na segunda semana, 3 % na terceira e 4 % na quarta, quinta e sexta semana de estudo) Na quarta semana de estudo, concomitante ao EF, os grupos S e ES iniciaram o CVS, procedimento que ocorreu diariamente por 19 dias Os estressores utilizados no CVS foram: 1 h em geladeira a 4 ºC; cepilho molhado, 12 h; isolamento social, 12 h; caixa inclinada em 45º, 12 h; caixa superlotada (caixa individual com 3 ratos), 12 h; luz acesa do biotério, 24 h Para a avaliação da produção de anticorpos (IgM, IgG2a e IgG1), todos os grupos foram imunizados com IgY de galinha no 24º e 38º dias de estudo Além disso, foram realizadas análises de hemograma completo; testes para avaliar os níveis séricos de creatina quinase, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, colesterol, triglicerídeos, creatinina, uréia, proteína total, glicose e lactato; avaliação comportamental (teste de preferência por sacarose e campo aberto); avaliação do peso corporal e de órgãos Nos resultados, observamos que o EF e o CVS potencializaram a produção de anticorpos IgG1 apenas nos ratos machos, quando realizados de forma isolada Por outro lado, esse efeito não foi observado em ratos submetidos concomitantemente ao EF e ao CVS O CVS provocou aumento das adrenais e redução na preferência por sacarose em machos Nas variáveis relacionadas ao treinamento, o EF impediu o rápido aumento do lactato, controlou o peso corporal, reduziu a gordura peritoneal e hipertrofiou o coração em ambos os sexos Concluímos que ratos machos Wistar são mais suscetíveis ao CVS que as fêmeas e que o EF promove melhorias morfofisiológicas independente do sexo Em relação à imunidade, ambos, EF e CVS favoreceram a resposta imune humoral nos ratos machosItem Produção de anticorpos IgY e sua interação com beta-lactâmicos contra Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa multirresistentes(2020-12-18) Gameiro, Juliana Gutschow; Venâncio, Emerson José; Costa, Ivete Conchon; Fernandes, Eduardo Vignoto; Marroni, Floristher Elaine CarraraA preocupação com a resistência bacteriana a antimicrobianos tem levado a investigação de novas estratégias para o tratamento de infecções bacterianas, especialmente as causadas por Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa. Imunoglobulina Y (IgY) é uma classe de anticorpos presente na gema de ovos de aves que tem sua ação antimicrobiana investigada contra diversas espécies de bactérias. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi obter anticorpos IgY específicos e avaliar in vitro a sua atividade contra P. aeruginosa e A. baumannii multirresistentes em combinação com beta-lactâmicos. Para isso, galinhas poedeiras receberam sete inoculações com amostras inativadas das cepas selecionadas com intervalos de 15 a 45 dias entre as inoculações. A partir da terceira semana os ovos foram coletados e a IgY extraída. Inicialmente foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos antibióticos ceftazidima, meropenem e imipenem para microrganismos testados e a atividade antibacteriana dos anticorpos IgY produzidos contra Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa multirresistentes. A seguir foi avaliada a interação dos antibióticos e os anticorpos IgY produzidos. Como resultados, após a terceira imunização foi obtido IgY específica, com variações no tempo para a estabilização da produção de IgY entre as diferentes cepas. Houve uma redução de quatro vezes na CIM da cepa OXA-253 para o meropenem e duas vezes para as CIMs do meropenem e ceftazidima da cepa OXA-23 quando associado à IgY. Este estudo demonstrou que há diferenças na produção de IgY em resposta as diferentes cepas. Além disso, houve redução nos valores de CIM no teste de sinergismo, para meropenem nas cepas OXA-23 e OXA-253 e ceftazidima na cepa OXA-253, nas demais cepas essa ação não foi observada. Como opções terapêuticas em microrganismos multirresistentes é limitada, estes resultados abrem caminhos para a aplicação da IgY como um complemento de terapias antimicrobianas entre bactérias multirresistentes.Item Produção e aplicação de anticorpos IGY anti-nucleoproteína para detecção do vírus influenza A em suínosSilva, Miriele Caroline da; Venâncio, Emerson José [Orientador]; Ono, Mário Augusto; Itano, Eiko Nakagawa; Fernandes, Eduardo Vignoto; Loyola, WagnerResumo: Os anticorpos são importantes ferramentas em testes de diagnóstico A utilização de anticorpos IgY apresenta diversas vantagens em relação aos anticorpos de mamíferos e vários estudos mostram sua aplicação em técnicas de imunodiagnóstico Assim, esse trabalho teve como objetivo produzir anticorpos IgY anti-nucleoproteína do vírus influenza A (IAV) e avaliar sua aplicação na detecção do vírus IAV por imunocitoquímica (ICQ) e imunohistoquímica (IHQ) Para tanto, galinhas poedeiras da linhagem White Leghorn foram inoculadas com 2 µg da nucleoproteína (NP) nos dias 1, 14, 28, 42, 84, 126 e 168 do experimento Sete dias após a 3ª, 5ª e 7ª inoculação, os ovos foram coletados e os anticorpos IgY foram extraídos por precipitação com sulfato de amônio Os títulos e a especificidade dos anticorpos purificados foram determinados por ELISA, western blotting, ICC e IHC As galinhas poedeiras inoculadas com a proteína NP produziram altos níveis de anticorpos específicos anti-NP após a 7ª inoculação Além disso, foi detectada uma coloração positiva em células MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) infectadas com IAV e incubadas com anticorpo IgY anti-NP No entanto, em tecidos pulmonares de suínos infectados não foi observada nenhuma coloração através do teste IHC Os dados obtidos mostraram que os anticorpos IgY anti-NP purificados das gemas de ovos se ligam especificamente ao IAV, com o reconhecimento dos principais subtipos de vírus circulantes em suínos (H1N1, H1N2 e H3N2), reforçando sua utilidade no diagnóstico de IAVItem Quantificação da carga interna de treinamento, da imunoglobulina A e de marcadores psicométricos de estresse e recuperação durante um período pré-competitivo em atletas de jiu jitsuCampos, Flávia; Ramos, Solange de Paula [Orientador]; Fernandes, Eduardo Vignoto; Freitas, Victor Hugo deResumo: Esse estudo teve como objetivo quantificar a carga interna de treinamento e seus efeitos sobre a imunoglobulina A (IgA) e em marcadores de estresse e recuperação durante um período pré-competitivo em atletas de Brazilian Jiu Jitsu Para a investigação, foram acompanhados 13 atletas do sexo masculino, com idade de 23 a 45 anos (79,35 ± 13,8 kg; 1,76 ± ,4 cm) O programa de treinamento consistiu de treino físico e técnico tático durante oito semanas O treinamento era dividido em duas sessões diárias Antes do início do protocolo de treinamento, na quarta semana e na oitava semana, houve a coleta de saliva dos atletas para análise de concentração de IgA, fluxo salivar e taxa de secreção de IgA Para o monitoramento da carga interna gerada no organismo do atleta, tanto nos treinos físicos como nos técnicos-táticos, foi utilizado o método da Percepção subjetiva de esforço da sessão (PSE da sessão) por meio do produto da duração do treinamento e dos valores de esforço percebido obtidos através da escala de Borg CR-1 modificada por Foster Análises complementares de monotonia e Strain de treinamento também foram avaliadas O Recovery Stress Questionnaire for Athletes (REST-Q Sport) foi utilizado para medir o equilíbrio do estresse e recuperação refletido através do contexto do treino Sua aplicação foi realizada todo começo de semana levando em consideração as últimas 72 h O teste de Shapiro-Wilk avaliou a distribuição dos dados, sendo esses com distribuição normal, descritos com média e desvio padrão e os dados sem distribuição normal, descritos em mediana e quartis Para comparação entre as semanas, o teste de Anova para medidas repetidas com pós hoc teste de Tukey e Bonferroni (dados normais) ou teste de Friedman com pós teste de Dunn para variáveis não paramétricas A carga de treinamento foi superior na primeira semana em relação às demais, nos treinos técnico-táticos os valores permaneceram mais estáveis, com redução na última semana Os valores de monotonia e Strain acompanharam os valores de carga de treinamento, apresentando os maiores valores na primeira semana Em relação ao REST-Q Sport nas primeiras duas semanas foi demonstrado níveis de estresse alto em relação aos níveis de recuperação O fluxo salivar e a taxa de secreção de IgA tiveram uma redução na quarta semana Houve correlação negativa significante entre os deltas de monotonia e strain com fluxo salivar da oitava semana de experimento Entretanto, não houve correlações significantes entre os valores de carga de treinamento, monotonia e strain avaliados na última semana de treinamento com as medidas de fluxo salivar, concentração de IgA e taxa de secreção de IgA De acordo com os resultados pode-se concluir que a carga interna de treinamento reduziu ao longo das semanas pré-competitiva, a qual foi acompanhada pela redução da monotonia e Strain; além disso, foi demonstrado que a carga imposta de treinamento não alterou de forma substancial os índices de estresse e recuperação relatados pelos atletas, bem como a concentração de IgA salivar em atletas de Brazilian Jiu Jitsu