Marcelino-Guimarães, Francismar Corrêa [Orientador]Kuma, Kátia Miki2024-05-012024-05-012014.00https://repositorio.uel.br/handle/123456789/15155Resumo: Os métodos aplicados à analise funcional de genes são de fundamental importância na validação de resultados obtidos de estudos in silico e/ou de prospecção gênica Os métodos de transformação genética para a obtenção de tecidos com expressão transiente e de rápidos resultados são os de maior interesse Dessa forma, a transformação via A rhizogenes torna-se um método rápido para a obtenção de plantas contendo raízes transformadas, além de se mostrar eficiente em estudos de superexpressão e/ou silenciamento de genes relacionados a estresses causados por fitopatógenos de raízes Alguns protocolos têm sido adaptados em soja, mas há limitações na eficiência de transformação, levando a um reduzido número de plantas em bom estado para a condução de bioensaios Neste trabalho, o método de transformação de raízes de soja com A rhizogenes foi otimizado permitindo uma elevação significativa na eficiência na transformação e recuperação de plantas transformadas, visando sua aplicação em estudos envolvendo a interação da soja com nematoides Após a adição de uma etapa de recuperação via hidroponia e alteração no processo de seleção com a retirada do antibiótico higromicina, foi obtida uma taxa de 55% de eficiência de transformação As análises de RNAm conduzidas via RT-qPCR são amplamente utilizadas para a validação do perfil de expressão gênica, uma vez que constitui uma metodologia muito sensível, especifica, rápida e com boa reprodutibilidade Tais análises necessitam do emprego de genes normalizadores, cujo níveis de expressão permaneçam invariáveis entre os diferentes órgãos, estágios de desenvolvimento e tratamento em estudo Desse modo, tais normalizadores são indispensáveis à precisão da quantificação da expressão gênica, eliminando variações devido à quantidade inicial de cDNA adicionado nas reações, garantindo que apenas as variações na expressão dos genes sejam consideradas Neste trabalho sete genes comumente utilizados como normalizadores em ensaios de RT-qPCR (GmELF1-a, GmELF1-ß, GmTUA, GmTUB, Gmß-actina, GmGAPDH e o GmRNAr18S) foram avaliados quando à estabilidade de expressão em raízes transformadas via A rhizogenes, submetidas à infecção com M javanica, nos períodos de inoculação de 8 e 5 dpi (dias após inoculação), a fim de identificar os melhores normalizadores sob tais condições Os genes GmELF1-ß e GmELF1-a foram os mais estáveis em todas as análises comparativas enquanto o gene GmGAPDH foi o que apresentou menor estabilidadeBiotecnologia agrícolaGenesSojaCultivoGenética vegetalAgricultural biotechnologyBreedingPlant geneticsBiotechnologyFood - SoybeanDissertação