Varéa-Pereira, Geni [Orientador]Oliveira, Jakeliny Akemy Yamamoto de2024-05-012024-05-012008.00https://repositorio.uel.br/handle/123456789/11063Resumo: Beauveria bassiana é um fungo entomopatogênico isolado de insetos mortos na natureza e tem sido amplamente estudado devido a sua capacidade de infectar e matar várias espécies de insetos Os fungos apresentam uma vantagem em relação a outros entomopatógenos, pois não precisam ser ingeridos para causar a infecção Conídios infectantes penetram no exoesqueleto do inseto por meio da ação de enzimas hidrolíticas como proteases, quitinases e lipases produzidas em resposta a constituição da cutícula do inseto O objetivo deste trabalho foi purificar e caracterizar as proteases extracelulares produzidas pela cepa brasileira de B Bassiana CG432 previamente reativada em adultos de broca-do-café (Hypothenemus hampei) Para obtenção das proteases, a cepa CG432 foi cultivada em meio líquido basal contendo 1% de glucose, ,5% de extrato de levedura e inoculadas a 1% com uma suspensão 18 conídios/mL, a 28ºC e 15 rpm Os cultivos foram interrompidos no terceiro dia A purificação e caracterização das proteases extracelulares foram realizadas por ultrafiltração e cromatografia de exclusão molecular em gel Sephadex G-1 A atividade das proteases foi determinada em tampão glicina-NaOH 5 mM pH 9,5 por detecção de peptídeos solúveis liberados a 37ºC/3 min sobre soro albumina bovina pelo método de Hartree O fator de purificação obtido foi de 43, massa molecular de 23 kDa e 26 kDa por meio de eletroforese bidimensional PAGE-SDS, e ponto isoelétrico de 4,5, 56 % de ácido aspártico por cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa ODS-C18 e eluente tampão acetato-metanol (38:62) As proteases foram caracterizadas como serino proteases, com resíduos de cisteína, pois foram inibidas por fluoreto fenil-metil-sulfonil e ácido p-cloromercúriobenzóico As proteases do Pico II apresentaram Km 4x1-4 M sobre substrato tipo-subtilisinaEnzimas proteolíticasPurificaçãoBeauveria bassianaBroca-do-caféProteolytic enzymesCoffee berry borerPurificationDissertação