Mantovani, Mário Sérgio [Orientador]Marques, Lilian Areal2024-05-012024-05-012015.00https://repositorio.uel.br/handle/123456789/13169Resumo: O câncer de mama é a neoplasia que mais acomete as mulheres de todo mundo e a que representa as maiores taxas de mortalidade nesse grupo A maioria das drogas antineoplásicas atuais não apresentam seletividade e, portanto, afetam tanto as células tumorais quanto as saudáveis Dessa forma, a busca por novas drogas anticâncer é de grande interesse O monastrol é uma molécula sintética que atua como inibidor alostérico da cinesina mitótica Eg5 Estudos mostram que esta cinesina está superexpressa em células tumorais quando comparadas com células normais Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antiproliferativo do monastrol em célula humana tumoral de adenocarcinoma mamário (MCF-7) e não tumoral de epitélio de mama (HB4a) As células MCF-7 e HB4a foram expostas ao monastrol nas concentrações de 5, 25, 5, 75 e 1 µM para a análise de citotoxicidade (ensaio MTT) e proliferação celular (Real-time Cell Analyzer); e nas concentrações de 25 e 5 µM para os demais testes Foram avaliadas por citometria de fluxo a dinâmica do ciclo celular (Iodeto de propídeo) e indução de apoptose (Anexina V), além da obtenção de índice mitótico e apoptótico por análise morfológica com coloração de Hoechst 33342 Os níveis de mRNA de genes do ciclo celular (TP53, EG5, CCNA2, CCNB1, CCND1, CCNE1, CDC25A, CDC25C, CDKN1A, CDKN1B e CDKN1C), sinalizador de danos (GADD45A) e apoptose (BAX, BAK, BCL2 e BCLXL) foram verificados por RT-qPCR No ensaio de citotoxicidade, o monastrol reduziu a viabilidade em relação ao controle apenas na linhagem tumoral MCF-7 a partir da concentração de 5 µM Na avaliação da proliferação celular em tempo real também houve uma queda na proliferação das células MCF-7, enquanto as células HB4a não apresentaram alterações na cinética de crescimento A análise da apoptose mostrou que o monastrol não induz morte celular por apoptose em nenhuma das linhagens celulares Já na análise do ciclo celular, a exposição das células MCF-7 ao monastrol (5 µM) levou ao aumento da população G1 e G2/M com concomitante diminuição de S, enquanto na linhagem celular HB4a houve aumento de G2/M e diminuição de G1 Ambas células apresentaram aumento dos níveis de índice mitótico A análise da expressão gênica demonstrou que o monastrol aumentou em 5 vezes os níveis de RNAm do gene CDKN1A nas células MCF-7 e reduziu em 2 vezes os níveis de RNAm de CDKN1C na linhagem HB4a Estes resultados sugerem que o monastrol possui maior citotoxicidade sobre as células tumorais MCF-7, quando comparados com as células não tumorais HB4a, tornando-o um possível quimioterápico anticâncerCélulas cancerosasMamasCâncerCiclo celularGenéticaCancer cellsBreastCell cycleCancerDissertação